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benpaopinle金蟲 (小有名氣)
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[求助]
氨基DNA與羧基CdTe量子點的連接
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| 各位大俠,小蟲一直嘗試EDC/NHS連接氨基DNA和羧基CdTe量子點,都沒能成功,參考的文獻(xiàn)做法不大一樣,但原理應(yīng)該是一致的,不知問題出在哪兒,焦急等待大俠相助。。∥矣玫木彌_液是PB,活化液pH為6.0,50mM,不另外加鹽;反應(yīng)液pH為7.4,10mM,另外含有100mM的KCl!嘗試用pH6.0的緩沖液溶解量子點,并加入一定量的EDC/NHS(約100倍于量子點的濃度),經(jīng)活化后,放置一夜,有黑色顆;蛐鯛畛恋懋a(chǎn)生,此時還有熒光,當(dāng)離心后,上清液無熒光,將黑色顆粒超聲分散到pH7.4的緩沖液后,再測沒有熒光了!還嘗試過直接用pH7.4 的緩沖液直接加EDC/NHS活化2h,后加入DNA 的,最后溶液也沒了熒光。前后兩次的溶液都為2mL,量子點濃度約為50nM,DNA為0.75uM!求助各位有經(jīng)驗的大俠相助,會追加金幣!。 |
羧基活化EDC|DCC,NHS |
金蟲 (小有名氣)
木蟲 (小有名氣)
| 第一種情況可以很明確的回答你,羧基穩(wěn)定的量子點(MPA或者TGA),是不能在酸性條件下穩(wěn)定存在的,所以你的6.0的緩沖溶液是不行的,酸性條件下會導(dǎo)致量子點團(tuán)聚沉淀,然后沒有熒光;你的第二種方法應(yīng)該是正確的,一般用超濾管先小轉(zhuǎn)速離心,出去溶液中多余的穩(wěn)定劑或者一些Cd和穩(wěn)定劑的絡(luò)合物,然后用7.4的PBS重新分散量子點,隨后加入EDC和NHS攪拌活化,在加入DNA或者抗原抗體攪拌反應(yīng),然后4度過夜保存,第二天用紫外,熒光,紅外或者是動態(tài)光散射表征。 |
金蟲 (小有名氣)
金蟲 (小有名氣)

用戶注銷 (小有名氣)
金蟲 (小有名氣)
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真是不好意思,關(guān)于這個問題,我也是很迷茫,沒有很好的表征手段!我查過文獻(xiàn),也詢問過師兄、老師,都沒有什么好的方法啊!比如說從熒光方面,有文獻(xiàn)報道QDs修飾上DNA后表面缺陷減少,熒光強度增強,但也有說熒光強度下降的,比如被DNA猝滅,但并沒有具體說明為什么;熒光發(fā)射位置前后不變或移動很小。有關(guān)于紫外的變化,目前我也沒怎么嘗試,因為樣品量太少,沒法處理,但從文獻(xiàn)上看,肯定有DNA的紫外峰,何況還能根據(jù)DNA的吸收強度估算每個量子點上修飾了幾條DNA。除了熒光、紫外,紅外也可以檢測酰胺鍵來判斷是否有修飾上。動態(tài)光散射也可以根據(jù)修飾前后QDs的水力半徑來粗略估計,但樣品肯定是經(jīng)過離心洗脫后的了。除上面的手段外,我真不知道該怎么表征,TEM和SEM應(yīng)該看不到量子點表面的DNA啊,我真的也是很糾結(jié)...說這么多,也不知道你是怎樣修飾的?希望可以交流一下! |
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金蟲 (小有名氣)
木蟲 (正式寫手)
金蟲 (小有名氣)
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