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benpaopinle金蟲 (小有名氣)
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[求助]
氨基DNA與羧基CdTe量子點的連接
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| 各位大俠，小蟲一直嘗試EDC/NHS連接氨基DNA和羧基CdTe量子點，都沒能成功，參考的文獻(xiàn)做法不大一樣，但原理應(yīng)該是一致的，不知問題出在哪兒，焦急等待大俠相助�。。∥矣玫木彌_液是PB，活化液pH為6.0，50mM，不另外加鹽；反應(yīng)液pH為7.4，10mM，另外含有100mM的KCl！嘗試用pH6.0的緩沖液溶解量子點，并加入一定量的EDC/NHS（約100倍于量子點的濃度），經(jīng)活化后，放置一夜，有黑色顆�；蛐鯛畛恋懋a(chǎn)生，此時還有熒光，當(dāng)離心后，上清液無熒光，將黑色顆粒超聲分散到pH7.4的緩沖液后，再測沒有熒光了！還嘗試過直接用pH7.4 的緩沖液直接加EDC/NHS活化2h，后加入DNA 的，最后溶液也沒了熒光。前后兩次的溶液都為2mL，量子點濃度約為50nM，DNA為0.75uM！求助各位有經(jīng)驗的大俠相助，會追加金幣�。�！ |
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 羧基活化EDC|DCC,NHS |
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lucasone
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【答案】應(yīng)助回帖
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benpaopinle: 金幣+10, ★★★很有幫助, 有知道了不少！謝謝！ 2013-11-19 10:24:58
benpaopinle: 金幣+10, ★★★很有幫助, 有知道了不少！謝謝！ 2013-11-19 10:24:58
| 第一種情況可以很明確的回答你，羧基穩(wěn)定的量子點（MPA或者TGA），是不能在酸性條件下穩(wěn)定存在的，所以你的6.0的緩沖溶液是不行的，酸性條件下會導(dǎo)致量子點團(tuán)聚沉淀，然后沒有熒光；你的第二種方法應(yīng)該是正確的，一般用超濾管先小轉(zhuǎn)速離心，出去溶液中多余的穩(wěn)定劑或者一些Cd和穩(wěn)定劑的絡(luò)合物，然后用7.4的PBS重新分散量子點，隨后加入EDC和NHS攪拌活化，在加入DNA或者抗原抗體攪拌反應(yīng)，然后4度過夜保存，第二天用紫外，熒光，紅外或者是動態(tài)光散射表征。 |
9樓2013-11-18 14:48:29
ypgou123
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2樓2013-11-11 21:53:54
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4樓2013-11-12 14:49:41
benpaopinle
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真是不好意思，關(guān)于這個問題，我也是很迷茫，沒有很好的表征手段！我查過文獻(xiàn)，也詢問過師兄、老師，都沒有什么好的方法��！比如說從熒光方面，有文獻(xiàn)報道QDs修飾上DNA后表面缺陷減少，熒光強度增強，但也有說熒光強度下降的，比如被DNA猝滅，但并沒有具體說明為什么；熒光發(fā)射位置前后不變或移動很小。有關(guān)于紫外的變化，目前我也沒怎么嘗試，因為樣品量太少，沒法處理，但從文獻(xiàn)上看，肯定有DNA的紫外峰，何況還能根據(jù)DNA的吸收強度估算每個量子點上修飾了幾條DNA。除了熒光、紫外，紅外也可以檢測酰胺鍵來判斷是否有修飾上。動態(tài)光散射也可以根據(jù)修飾前后QDs的水力半徑來粗略估計，但樣品肯定是經(jīng)過離心洗脫后的了。除上面的手段外，我真不知道該怎么表征，TEM和SEM應(yīng)該看不到量子點表面的DNA啊，我真的也是很糾結(jié)...說這么多，也不知道你是怎樣修飾的？希望可以交流一下！ |
5樓2013-11-12 15:15:56
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