 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 9 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 1619 | 回復(fù): 8 | ||||
24K_純虹鐵蟲 (初入文壇)
|
[交流]
有關(guān)重疊PCR的問題，請(qǐng)各位講解一下 已有5人參與
|
| 大家好，我現(xiàn)在在做一個(gè)重疊PCR的實(shí)驗(yàn)，我要連接的三個(gè)片段X、Cm（氯霉素片段）、Y均750bp，我先通過正常的PCR技術(shù)獲得X、Cm（氯霉素片段）、Y條帶，然后嘗試先重疊X、Cm，得到XC之后再連Y的時(shí)候怎么也連不上，請(qǐng)問為什么？我是新手，請(qǐng)指點(diǎn)一下有關(guān)重疊PCR當(dāng)中需要注意的地方，謝謝！ |
回復(fù)此樓» 收錄本帖的淘帖專輯推薦
 分子生化實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn)積累 |
» 猜你喜歡
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之小鼠實(shí)驗(yàn)：嚴(yán)謹(jǐn)設(shè)計(jì)，解析生命機(jī)制的重要載體
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之重金屬檢測(cè)：精準(zhǔn)篩查，守護(hù)健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤(rùn)色/翻譯怎么收費(fèi)?
已經(jīng)有279人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“蛙測(cè)重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標(biāo)南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
留學(xué)--博士招生
已經(jīng)有16人回復(fù)
-
化學(xué)工程，本211，求調(diào)劑，ab區(qū)不限
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
邵陽學(xué)院食品與化學(xué)工程學(xué)院碩士調(diào)劑
已經(jīng)有0人回復(fù)
» 本主題相關(guān)價(jià)值貼推薦，對(duì)您同樣有幫助:
- 3個(gè)片段的重疊延伸pcr,pcr反應(yīng)條件？
已經(jīng)有7人回復(fù)
- 重疊PCR引物，兩個(gè)片段分別回收后存在雜帶是怎么回事
已經(jīng)有4人回復(fù)
- 求關(guān)于Overlap PCR(重疊延伸PCR)的具體實(shí)驗(yàn)過程及原理
已經(jīng)有10人回復(fù)
- 重疊延伸PCR第一輪做出來了，但是第二輪P不出來
已經(jīng)有29人回復(fù)
- 求助重疊延伸pcr
已經(jīng)有5人回復(fù)
- 3個(gè)片段的重疊pcr能否一步到位？
已經(jīng)有11人回復(fù)
- 重疊延伸PCR引物合成求助
已經(jīng)有15人回復(fù)
- 重疊PCR應(yīng)該怎么做？
已經(jīng)有9人回復(fù)
- 重疊延伸PCR設(shè)計(jì)引物
已經(jīng)有3人回復(fù)
- 重疊PCR克隆大片段
已經(jīng)有4人回復(fù)
- 重疊pcr\跳躍pcr的問題
已經(jīng)有14人回復(fù)
- 如何設(shè)計(jì)重疊延伸PCR引物
已經(jīng)有14人回復(fù)
- 【求助/交流】重疊PCR問題
已經(jīng)有12人回復(fù)
- 【求助/交流】重疊PCR相關(guān)問題。
已經(jīng)有8人回復(fù)
- 【求助/交流】重疊PCR的問題???
已經(jīng)有7人回復(fù)
- 【求助/交流】重疊延伸pcr第二輪條帶較弱，彌散
已經(jīng)有12人回復(fù)
sun_in_night
木蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 51 (初中生)
- 金幣: 1706.7
- 紅花: 11
- 帖子: 171
- 在線: 123.1小時(shí)
- 蟲號(hào): 1494034
- 注冊(cè): 2011-11-16
- 性別: GG
- 專業(yè): 植物遺傳學(xué)
2樓2013-11-22 23:16:25
gyesang
榮譽(yù)版主 (著名寫手)
-
專家經(jīng)驗(yàn): +24 - MolEPI: 31
- 應(yīng)助: 599 (博士)
- 貴賓: 2.689
- 金幣: 24334.9
- 散金: 1088
- 紅花: 88
- 沙發(fā): 2
- 帖子: 2327
- 在線: 623.1小時(shí)
- 蟲號(hào): 849017
- 注冊(cè): 2009-09-16
- 性別: GG
- 專業(yè): 細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)
- 管轄: 分子生物
★
小木蟲: 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
小木蟲: 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
3樓2013-11-23 01:21:00
Fleaves
至尊木蟲 (著名寫手)
- 應(yīng)助: 100 (初中生)
- 金幣: 18980.6
- 散金: 526
- 紅花: 42
- 帖子: 2644
- 在線: 412.1小時(shí)
- 蟲號(hào): 1473397
- 注冊(cè): 2011-11-02
- 性別: GG
- 專業(yè): 植物病理學(xué)
4樓2013-11-23 04:12:12
24K_純虹
鐵蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 244
- 帖子: 46
- 在線: 9.3小時(shí)
- 蟲號(hào): 2654338
- 注冊(cè): 2013-09-14
- 性別: GG
- 專業(yè): 生物化學(xué)
5樓2013-11-23 22:10:10
nannanz2012
銀蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 6 (幼兒園)
- 金幣: 254.5
- 散金: 5
- 紅花: 1
- 帖子: 66
- 在線: 148.6小時(shí)
- 蟲號(hào): 2066374
- 注冊(cè): 2012-10-16
- 專業(yè): 微生物生理與生物化學(xué)
6樓2013-11-24 13:46:30
lingbi
銀蟲 (正式寫手)
- 應(yīng)助: 4 (幼兒園)
- 金幣: 581.5
- 帖子: 313
- 在線: 61.8小時(shí)
- 蟲號(hào): 341544
- 注冊(cè): 2007-04-08
- 性別: MM
- 專業(yè): 疫苗學(xué)
★
小木蟲: 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
小木蟲: 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
|
我也是正要做重疊PCR，做第一步搭接反應(yīng)，在網(wǎng)上查到一些方案（12個(gè)引物片段），說每條引物加1ul，PCR65℃ 5cycle，60℃ 5cycle。而我在小木蟲上下了一篇文章PCR-based accurate synthesis of long DNA sequences，引物的量加的極少，F(xiàn)01、R01各1ul,中間的引物（10條，引物濃度30pmol）各取1ul混合，混合后取0.5ul與F01、R01混在一起作為引物,PCR 58℃ 27cycle，還72℃延伸10min 。這兩個(gè)方法完全沒有相關(guān)性。 版主能夠給一個(gè)推薦反應(yīng)條件嗎？ 另外想問，引物加多少合適?英文的文獻(xiàn)引物的濃度會(huì)不會(huì)太低？ 退貨溫度根據(jù)什么定的？60℃左右會(huì)不會(huì)特異性太強(qiáng)P不出東西？ 望指點(diǎn)。 |
7樓2014-01-08 23:41:53
gyesang
榮譽(yù)版主 (著名寫手)
-
專家經(jīng)驗(yàn): +24 - MolEPI: 31
- 應(yīng)助: 599 (博士)
- 貴賓: 2.689
- 金幣: 24334.9
- 散金: 1088
- 紅花: 88
- 沙發(fā): 2
- 帖子: 2327
- 在線: 623.1小時(shí)
- 蟲號(hào): 849017
- 注冊(cè): 2009-09-16
- 性別: GG
- 專業(yè): 細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)
- 管轄: 分子生物
8樓2014-01-09 11:21:02
lingbi
銀蟲 (正式寫手)
- 應(yīng)助: 4 (幼兒園)
- 金幣: 581.5
- 帖子: 313
- 在線: 61.8小時(shí)
- 蟲號(hào): 341544
- 注冊(cè): 2007-04-08
- 性別: MM
- 專業(yè): 疫苗學(xué)
9樓2014-01-09 22:55:31
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 24K_純虹 的主題更新
| 9 | 1/1 | 返回列表 |
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 340求調(diào)劑 +6 | Amber00 2026-03-26 | 6/300 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 一志愿北化085600材料專碩275|有文章專利｜求調(diào)劑 +7 | Micky11223 2026-03-25 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 322求調(diào)劑 +5 | 舊吢 2026-03-24 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 材料求調(diào)劑 一志愿哈工大總分298分，前三科223分 +5 | dongfang59 2026-03-27 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 340求調(diào)劑 +5 | jhx777 2026-03-27 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 331環(huán)境科學(xué)與工程求調(diào)劑 +3 | 熠然好運(yùn)氣 2026-03-27 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 085701環(huán)境工程求調(diào)劑 +9 | 多久上課 2026-03-27 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 086000調(diào)劑 +3 | 7901117076 2026-03-26 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 266求調(diào)劑 +11 | 陽陽哇塞 2026-03-27 | 12/600 |
|
|
|
[考研] 272求調(diào)劑 +7 | 腳滑的守法公民 2026-03-27 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 考研化學(xué)308分求調(diào)劑 +10 | 你好明天你好 2026-03-23 | 12/600 |
|
|
|
[考研] 一志愿華東理工大學(xué)081700，初試分?jǐn)?shù)271 +6 | kotoko_ik 2026-03-23 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 機(jī)械學(xué)碩310分，數(shù)一英一，一志愿211本科雙非找調(diào)劑信息 +3 | @357 2026-03-25 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 081700 調(diào)劑 267分 +11 | 迷人的哈哈 2026-03-23 | 11/550 |
|
|
|
[考研] 一志愿天津大學(xué)339材料與化工求調(diào)劑 +3 | 江往賣魚 2026-03-26 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 求b區(qū)院校調(diào)劑 +4 | 周56 2026-03-24 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 282求調(diào)劑 +3 | wcq131415 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 一志愿北化315 求調(diào)劑 +3 | akrrain 2026-03-24 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 材料專碩331求調(diào)劑 +4 | 鮮當(dāng)牛 2026-03-24 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 277分求調(diào)劑，跨調(diào)材料 +3 | 考研調(diào)劑lxh 2026-03-24 | 3/150 |
|