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hospitals新蟲 (初入文壇)
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[求助]
PCR的可重復(fù)性 已有4人參與
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最近，做實(shí)驗(yàn)出現(xiàn)了特別詭異的事件，之前PCR擴(kuò)增很是順利，中間出差一周后再換了新溶的引物，就怎么也擴(kuò)不出來(lái)了。 這期間，DNA檢測(cè)沒(méi)有問(wèn)題，濃度在27-30ng/ul之間，260/280值在1.7-1.9之間；稀釋了DNA到10倍，50倍，100倍；引物是新的，別人也試過(guò)，引物沒(méi)有問(wèn)題；PCRmix也是新的，也換過(guò)牌子；換過(guò)PCR儀；換過(guò)操作的人....... 真是百思不得其解啊，望高人指點(diǎn)迷津啊，不甚感激！ 此外，我在N篇文獻(xiàn)上找到別人擴(kuò)增的引物和PCR條件，引物都是通用的，結(jié)果用到自己的實(shí)驗(yàn)上就總是沒(méi)有結(jié)果，實(shí)驗(yàn)一再的在重復(fù)重復(fù)，無(wú)望中~~~ |
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對(duì)，模板是gDNA，先說(shuō)一下PCR重復(fù)的問(wèn)題就是之前能夠成功擴(kuò)增的，這應(yīng)該能說(shuō)明引物沒(méi)有問(wèn)題吧�，F(xiàn)在同樣的條件就是無(wú)法擴(kuò)增，換過(guò)高保真酶，也無(wú)濟(jì)于事。一開(kāi)始考慮了模板降解問(wèn)題，也重新提過(guò)DNA，都不行。 再就是第二個(gè)問(wèn)題，同一個(gè)種的樣品，有的可以個(gè)體能夠擴(kuò)增，而其他卻怎么也擴(kuò)不出來(lái)，再就是我用同樣的模板擴(kuò)過(guò)另外一個(gè)基因片段，都是線粒體上的，正常擴(kuò)增，這說(shuō)明模板和PCR藥品都沒(méi)問(wèn)題的呀，真是頭疼死了。 |
9樓2013-12-01 21:52:37
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