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[求助]
求助哪位用瓊脂糖電泳跑過蛋白的高手 已有2人參與
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求助大神，我的樣品分子量最大有1000KDa,所以想用瓊脂糖凝膠電泳跑一下，不需要特別精確的，我只是要看一下他們變化的趨勢，但是第一次嘗試用的1%的瓊脂糖凝膠，沒有加EB，樣品未處理，跑出來我是用考馬斯亮藍染色然后脫色的，但是什么也沒有，是不是因為沒有處理樣品，還是電泳緩沖液需要換一下？求大神指導(dǎo) |
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Davidzjy
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4樓2013-12-03 13:22:22
Davidzjy
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【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
myprayer: 金幣+3, 贈人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2013-12-03 12:31:20
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有沒有用表面活性劑？不用活性劑肯定跑不出來 1 蛋白質(zhì)的二級結(jié)構(gòu)沒有被破壞 三維形態(tài)會影響摩擦力 2 不同蛋白的pI不同 在膠中前進的速率不一樣 PAGE中加入的表面活性劑（SDS等）會以固定比例結(jié)合在肽鍵上 破壞原有的扭曲 使肽鏈成為一條長鏈 并且 因為每個肽鍵結(jié)合固定數(shù)量的帶電分子 因此 肽鏈的帶電量和其長度基本成正比（肽鏈越長 肽鍵越多） 從而使得它們在膠中的行進速率成比例 |
2樓2013-12-03 11:38:35
3樓2013-12-03 13:14:59
5樓2013-12-03 14:14:34
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