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[求助]
PCR單引物擴(kuò)增問題
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小弟做了幾個1kb左右的目的片段的擴(kuò)增pcr，沒想到結(jié)果是這樣，一個博士跟我說這是單引物擴(kuò)增，還有可能退火溫度太低等等，不是很具體，想問問懂行的或者以前遇到過這種問題的大神們，怎么避免，如何改進(jìn)？ 24-26，12.5.png |
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古城十字路
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8樓2014-05-13 15:57:44
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【答案】應(yīng)助回帖
★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
gyesang: 金幣+2, 鼓勵交流！ 2013-12-06 14:39:02
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| 這種應(yīng)該就是非特異性擴(kuò)增,可能跟你的引物設(shè)計(jì)有關(guān),專一性不是很強(qiáng).想要避免非常困難,因?yàn)槟悴豢赡茉谧鲈囼?yàn)前就知道擴(kuò)增的結(jié)果. 一般要改進(jìn)的話,可以提高退火溫度,降低模板濃度或者降低引物濃度.當(dāng)然有些時候如果你的pcr buffer 有問題的話也會導(dǎo)致這種情況。如果反復(fù)設(shè)計(jì)引物都不成功的話，就要考慮是否是模板出問題了。 |
4樓2013-12-06 01:29:04
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