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hahayou36532鐵蟲 (小有名氣)
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[求助]
求助，分子生物學(xué)有些問題求解 已有1人參與
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hahayou36532
鐵蟲 (小有名氣)
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3樓2013-12-10 22:28:56
gaoyang636
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2樓2013-12-07 20:17:48
王龍蛋蛋
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1.確定你的那個(gè)酯酶的基因序列，設(shè)計(jì)引物，PCR擴(kuò)增目的基因 2.選擇載體，可用質(zhì)粒，利用酶切將目的基因與載體連接。一般連接后要送到公司測序 3.將連接好的質(zhì)粒轉(zhuǎn)入感受態(tài)細(xì)胞，一般是大腸桿菌細(xì)胞。然后搖菌，擴(kuò)增。 4.鋪板子，即LB板，里面會(huì)有抗生素，所以將均菌液涂板子后，帶有目的基因的的細(xì)菌會(huì)繼續(xù)增長。生長一般過夜 差不多就這樣吧 |
4樓2013-12-11 16:41:05
王龍蛋蛋
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1.確定你要獲得的酯酶的基因序列，然后設(shè)計(jì)引物，PCR對目的基因進(jìn)行擴(kuò)增。 2.一般載體可以選擇質(zhì)粒，用酶切將目的基因和質(zhì)粒進(jìn)行連接。 3.感受態(tài)細(xì)胞可以選擇大腸桿菌，將連接好的質(zhì)粒轉(zhuǎn)化到細(xì)胞中，搖菌，讓細(xì)菌生長。一般再送到公司進(jìn)行測序。 4.鋪板子，也就是LB板，可以選擇性的使帶有目的基因的細(xì)菌存活繼續(xù)生長。 大致步驟就是 PCR--連接--轉(zhuǎn)化 恩 差不多就這樣了。 |
5樓2013-12-11 16:49:03
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