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hahayou36532鐵蟲(chóng) (小有名氣)
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[求助]
求助，分子生物學(xué)有些問(wèn)題求解 已有1人參與
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1、PCR-RFLP 引物特殊要求：PCR產(chǎn)物的長(zhǎng)度為什么是200-1000bp? 酶切后產(chǎn)物片斷的大小差距為什么是100bp以上？ 2、瓊脂糖凝膠電泳分離0.2-10kb的DNA。還是0.2-20kb的DNA？ 聚丙烯酰胺凝膠電泳常用于分離小于500nt（Nucleotide）的RNA。它的大小和KB有什么區(qū)別呢？ 在線等大神解答。。。我學(xué)食品的對(duì)這個(gè)真不了解。。。  |
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王龍蛋蛋
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【答案】應(yīng)助回帖
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gyesang: 金幣+2, 鼓勵(lì)交流！ 2013-12-11 20:54:56
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1.確定你要獲得的酯酶的基因序列，然后設(shè)計(jì)引物，PCR對(duì)目的基因進(jìn)行擴(kuò)增。 2.一般載體可以選擇質(zhì)粒，用酶切將目的基因和質(zhì)粒進(jìn)行連接。 3.感受態(tài)細(xì)胞可以選擇大腸桿菌，將連接好的質(zhì)粒轉(zhuǎn)化到細(xì)胞中，搖菌，讓細(xì)菌生長(zhǎng)。一般再送到公司進(jìn)行測(cè)序。 4.鋪板子，也就是LB板，可以選擇性的使帶有目的基因的細(xì)菌存活繼續(xù)生長(zhǎng)。 大致步驟就是 PCR--連接--轉(zhuǎn)化 恩 差不多就這樣了。 |
5樓2013-12-11 16:49:03
gaoyang636
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2樓2013-12-07 20:17:48
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3樓2013-12-10 22:28:56
王龍蛋蛋
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gyesang: 金幣+2, 鼓勵(lì)交流！ 2013-12-11 20:54:51
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1.確定你的那個(gè)酯酶的基因序列，設(shè)計(jì)引物，PCR擴(kuò)增目的基因 2.選擇載體，可用質(zhì)粒，利用酶切將目的基因與載體連接。一般連接后要送到公司測(cè)序 3.將連接好的質(zhì)粒轉(zhuǎn)入感受態(tài)細(xì)胞，一般是大腸桿菌細(xì)胞。然后搖菌，擴(kuò)增。 4.鋪板子，即LB板，里面會(huì)有抗生素，所以將均菌液涂板子后，帶有目的基因的的細(xì)菌會(huì)繼續(xù)增長(zhǎng)。生長(zhǎng)一般過(guò)夜 差不多就這樣吧 |
4樓2013-12-11 16:41:05
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