 |
 |
 |
| 24小時(shí)熱門(mén)版塊排行榜 |
- >論壇更新日志 (6072)
- >導(dǎo)師招生 (1258)
- >考研 (1119)
- >文獻(xiàn)求助 (491)
- >蟲(chóng)友互識(shí) (302)
- >考博 (208)
- >休閑灌水 (185)
- >基金申請(qǐng) (183)
- >碩博家園 (140)
- >招聘信息布告欄 (108)
- >博后之家 (91)
- >綠色求助(高懸賞) (51)
- >論文投稿 (46)
- >找工作 (40)
- >SciFinder/Reaxys (26)
- >外文書(shū)籍求助 (19)
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 5 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 2155 | 回復(fù): 26 | ||
| 當(dāng)前只顯示滿足指定條件的回帖，點(diǎn)擊這里查看本話題的所有回帖 | ||
愛(ài)吃小蘋(píng)果新蟲(chóng) (初入文壇)
|
[求助]
連接不成功，跪求指導(dǎo)！ 已有4人參與
|
|
| 最近在做構(gòu)建，但是連接連了很久都沒(méi)連上，一端是平末端，一段是粘性末端，沒(méi)別的位點(diǎn)可以選了，只能用這個(gè)。用的Takara的T4連接酶，連接是按摩爾比加的，1：3，1：5，1：10都用過(guò)，還加了PEG4000，4°、16°過(guò)夜都試過(guò)，平板上會(huì)有很多菌落，但是菌落PCR一直都沒(méi)有條帶，應(yīng)該都試載體自連，片段3000bp，載體4900bp。哪位大神做過(guò)類似的，麻煩支支招吧，愁死了！ |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：實(shí)驗(yàn)器材的 “烏龍”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：和實(shí)驗(yàn)材料的 “斗智斗勇”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤(rùn)色/翻譯怎么收費(fèi)?
已經(jīng)有67人回復(fù)
-
蛋白質(zhì)檢測(cè)：精準(zhǔn)分析，解鎖生物分子的密碼
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之小鼠實(shí)驗(yàn)：嚴(yán)謹(jǐn)設(shè)計(jì)，解析生命機(jī)制的重要載體
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之重金屬檢測(cè)：精準(zhǔn)篩查，守護(hù)健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“蛙測(cè)重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標(biāo)南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
» 本主題相關(guān)價(jià)值貼推薦，對(duì)您同樣有幫助:
- 關(guān)于構(gòu)建pET28a載體轉(zhuǎn)化后IPTG誘導(dǎo)跑SDS-PAGE膠問(wèn)題。
已經(jīng)有25人回復(fù)
愛(ài)吃小蘋(píng)果
新蟲(chóng) (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 321.3
- 帖子: 35
- 在線: 22.4小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 1742056
- 注冊(cè): 2012-04-07
- 專業(yè): 生物大分子結(jié)構(gòu)與功能
9樓2013-12-10 09:41:32
weishengsu5
木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
- 應(yīng)助: 1 (幼兒園)
- 金幣: 2526
- 紅花: 1
- 帖子: 469
- 在線: 374.2小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 1016558
- 注冊(cè): 2010-05-12
- 性別: GG
- 專業(yè): 生物化工與食品化工
2樓2013-12-09 22:43:51
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
gyesang: 金幣+2, 鼓勵(lì)交流！ 2013-12-09 23:37:00
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
gyesang: 金幣+2, 鼓勵(lì)交流！ 2013-12-09 23:37:00
|
假陽(yáng)性太多了，可能是載體自連了，所以菌液PCR 什么都沒(méi)有，很難挑到真陽(yáng)性。你用什么酶切的，在做連接體系的時(shí)候，按1.6%加內(nèi)切酶在連接反應(yīng)體系里，連接反應(yīng)完成后，在37度中讓內(nèi)切酶反應(yīng)半小時(shí)，把自連的載體切開(kāi)，這樣就減少了自連的假陽(yáng)性。后面在做就能簡(jiǎn)單點(diǎn)，我也和你一樣，現(xiàn)在假陽(yáng)性是解決了菌液PCR 陽(yáng)性也很正常，但提了質(zhì)粒又不對(duì) [ 發(fā)自小木蟲(chóng)客戶端 ] |
3樓2013-12-09 22:52:47
4樓2013-12-09 22:54:30
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 085600材料與化工調(diào)劑 +5 | A-哆啦Z夢(mèng) 2026-03-23 | 10/500 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 07化學(xué)280分求調(diào)劑 +3 | 722865 2026-03-23 | 3/150 |
|
|
[考研] 一志愿北京化工大學(xué) 070300 學(xué)碩 336分 求調(diào)劑 +5 | vv迷 2026-03-22 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 材料與化工085600，總分304，本科有兩篇sci參與，求調(diào)劑 +4 | 幸運(yùn)的醬醬 2026-03-22 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 308求調(diào)劑 +3 | 墨墨漠 2026-03-21 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 尋找調(diào)劑 +4 | 倔強(qiáng)芒? 2026-03-21 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 305分求調(diào)劑（食品工程） +4 | Sxy112 2026-03-21 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 354求調(diào)劑 +7 | Tyoumou 2026-03-18 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 一志愿華中科技大學(xué)071000，求調(diào)劑 +4 | 沿岸有貝殼6 2026-03-21 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 085600材料與化工306 +4 | z1z2z3879 2026-03-21 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 +6 | Mqqqqqq 2026-03-19 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 346求調(diào)劑[0856] +4 | WayneLim327 2026-03-16 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 +3 | Ma_xt 2026-03-17 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 一志愿武理材料305分求調(diào)劑 +6 | 想上岸的鯉魚(yú) 2026-03-18 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 一志愿 西北大學(xué) ，070300化學(xué)學(xué)碩，總分287，雙非一本，求調(diào)劑。 +3 | 晨昏線與星海 2026-03-18 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 295求調(diào)劑 +4 | 一志愿京區(qū)211 2026-03-18 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 招收調(diào)劑碩士 +4 | lidianxing 2026-03-19 | 12/600 |
|
|
|
[考研] 085410人工智能專碩317求調(diào)劑（0854都可以） +4 | xbxudjdn 2026-03-18 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 材料考研調(diào)劑 +3 | xwt。 2026-03-19 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 0703化學(xué)調(diào)劑 +3 | 妮妮ninicgb 2026-03-17 | 3/150 |
|