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空藍(lán)Y劫新蟲 (小有名氣)
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[求助]
電泳染色效果異常求助
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最近做等電聚焦電泳，目的蛋白條帶在6KD左右，其他步驟及過程正常，就是染色顯色一步出現(xiàn)問題。染色后的Marker，BSA對照，人白蛋白，都能很好的染色，唯獨我們的目的條帶蛋白不能被染色。肉眼觀察，能夠觀察到類似免疫沉淀反應(yīng)的白色條紋痕跡。幾乎可以判斷就是目的蛋白。但是它不能被染色，讓人很是無奈，求大俠幫助。 補(bǔ)充。我們是藥廠QC，目的蛋白是已經(jīng)做過千萬遍的很固定的東西，純化好后純度已經(jīng)很高了。以前做等電聚焦一切正常，雖然目的條帶淡點但是還不至于像現(xiàn)在一樣不能染色。染色液，固定液，都有新配過�？梢耘懦噭┘安僮髟�。并且，通過BSA，及人白蛋白的正常顯色，也能表明體系是正常的。但是這樣一來，目的蛋白不顯，就更是讓人不好理解了。 現(xiàn)在我們在進(jìn)行擴(kuò)建，工藝放大，或許有些不被注意的變動影響了實驗結(jié)果，求各路高手幫忙分析下。不勝感激。 |
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