 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 5 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 3688 | 回復(fù): 20 | ||
| 當(dāng)前只顯示滿足指定條件的回帖，點(diǎn)擊這里查看本話題的所有回帖 | ||
ptccc銅蟲 (初入文壇)
|
[求助]
PET-32A重組質(zhì)粒構(gòu)建 已有2人參與
|
|
| 最近在重組質(zhì)粒，遇上很多問題。首先就是我每次抽提質(zhì)粒的濃度總是很低。然后我那濃度低的質(zhì)粒雙酶切（Ecor1和xho1)后和目的基因連接。挑菌后菌液PCR，條帶比較弱，我擔(dān)心是假陽性，就抽提質(zhì)粒后用帶目的基因的引物做了PCR，條帶很亮，大小也對(duì)。然后雙酶切了，目的基因片段附近有點(diǎn)弱弱的條帶，我還不放心，就拿空質(zhì)粒和我認(rèn)為的重組質(zhì)粒跑了膠，一看，重組質(zhì)粒比較大，而且大小片段應(yīng)該對(duì)。。然后測(cè)序。測(cè)序結(jié)果是空質(zhì)粒�。。。。。。。。。�！我該怎么辦？從哪開始重做？？ |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤(rùn)色/翻譯怎么收費(fèi)?
已經(jīng)有65人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標(biāo)南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
留學(xué)--博士招生
已經(jīng)有16人回復(fù)
-
化學(xué)工程，本211，求調(diào)劑，ab區(qū)不限
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
湖北師范大學(xué)招調(diào)劑啦
已經(jīng)有6人回復(fù)
-
邵陽學(xué)院食品與化學(xué)工程學(xué)院碩士調(diào)劑
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
天津商業(yè)大學(xué) 生物與醫(yī)藥課題組招生
已經(jīng)有0人回復(fù)
» 本主題相關(guān)價(jià)值貼推薦，對(duì)您同樣有幫助:
- 求助包涵體變性復(fù)性純化用什么牌子的純化試劑盒比較好，求推薦。
已經(jīng)有4人回復(fù)
- 重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)到BL21（DE3）中用T7檢測(cè)沒條帶，用特異引物檢測(cè)有條帶，怎么回事
已經(jīng)有15人回復(fù)
- 求助！雙酶切驗(yàn)證總切出來四條帶，請(qǐng)親們幫忙看看，非常著急��！謝謝大家了！
已經(jīng)有32人回復(fù)
- 潤(rùn)色英文
已經(jīng)有3人回復(fù)
- 翻譯過的請(qǐng)潤(rùn)色，沒有翻譯的請(qǐng)翻譯為英文
已經(jīng)有2人回復(fù)
- 英文精細(xì)潤(rùn)色 生物學(xué) （已附中文）
已經(jīng)有1人回復(fù)
- 請(qǐng)高手潤(rùn)色英文翻譯 生物學(xué)
已經(jīng)有5人回復(fù)
- 漢譯英 生物學(xué)方向
已經(jīng)有1人回復(fù)
luwei13566
木蟲 (正式寫手)
- MolEPI: 3
- 應(yīng)助: 184 (高中生)
- 金幣: 4351.4
- 散金: 97
- 紅花: 35
- 帖子: 641
- 在線: 261.1小時(shí)
- 蟲號(hào): 2380655
- 注冊(cè): 2013-03-27
- 性別: GG
- 專業(yè): 微生物生理與生物化學(xué)
5樓2013-12-26 02:11:41
b6122
木蟲 (正式寫手)
- 應(yīng)助: 37 (小學(xué)生)
- 金幣: 2987.9
- 散金: 1000
- 紅花: 5
- 帖子: 636
- 在線: 46.9小時(shí)
- 蟲號(hào): 172913
- 注冊(cè): 2006-01-20
- 專業(yè): 生物醫(yī)用高分子材料
2樓2013-12-26 00:18:00
3樓2013-12-26 00:41:21
luwei13566
木蟲 (正式寫手)
- MolEPI: 3
- 應(yīng)助: 184 (高中生)
- 金幣: 4351.4
- 散金: 97
- 紅花: 35
- 帖子: 641
- 在線: 261.1小時(shí)
- 蟲號(hào): 2380655
- 注冊(cè): 2013-03-27
- 性別: GG
- 專業(yè): 微生物生理與生物化學(xué)
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
kx444555: 金幣+5, 鼓勵(lì)交流 2013-12-26 08:29:38
ptccc: 金幣+4, ★★★★★最佳答案, 謝謝~ 2013-12-26 21:42:58
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
kx444555: 金幣+5, 鼓勵(lì)交流 2013-12-26 08:29:38
ptccc: 金幣+4, ★★★★★最佳答案, 謝謝~ 2013-12-26 21:42:58
|
1.提質(zhì)粒濃度低 有可能是你提質(zhì)粒沒提好，細(xì)胞壁沒破開，如果手提質(zhì)粒不熟練就用試劑盒吧，也有可能是你保存質(zhì)粒的菌染菌了~，接菌的培養(yǎng)基加抗性了嗎？如果在加抗性的培養(yǎng)基里搖出來的菌提質(zhì)粒還是濃度低，那就用你提出來的濃度低的質(zhì)粒用不同的宿主菌再重新轉(zhuǎn)化一下，保存質(zhì)粒的菌株是JM109還是DH5a？？ 2.你用濃度很低的質(zhì)粒和基因同時(shí)雙酶切后處理了嗎，比如割膠回收或者純化？？還是直接混在一起酶連了？ 3.酶連后轉(zhuǎn)化，你的感受態(tài)細(xì)胞做的怎么樣？涂板的平板抗性加夠了嗎？？挑出來的轉(zhuǎn)化子提質(zhì)粒濃度還低？你平板上的轉(zhuǎn)化子長(zhǎng)得怎么樣，整個(gè)平板上都是小的單菌落轉(zhuǎn)化子嗎？你從你的篩選平板上挑單菌落接試管的同時(shí)扎板保存了嗎？扎的板子上的菌落長(zhǎng)得怎么樣？ 4.你用PCR來驗(yàn)證重組質(zhì)粒只能說明你的轉(zhuǎn)化子里的質(zhì)粒里含有重組質(zhì)粒，而不能證明純度，你雙酶切后目的條帶處很弱有兩個(gè)可能：一是你雙酶切處理的不徹底，就是酶切時(shí)間不夠長(zhǎng)，再者就是你的質(zhì)粒不純，咱們跑的瓊脂糖凝膠是有個(gè)分辨率的，膠上看不見的不一定沒有。從測(cè)序結(jié)果上也可以看出這一點(diǎn)。~因此，你從轉(zhuǎn)化子里提的質(zhì)粒是重組質(zhì)粒和空載質(zhì)粒的混合物，~而且你的重組質(zhì)粒貌似要比空載的多一些~~ 解決的辦法很簡(jiǎn)單，就拿你從轉(zhuǎn)化子里提的質(zhì)粒重新做一下轉(zhuǎn)化，換個(gè)宿主菌做感受態(tài)，以前是BL21的話可以先用個(gè)DH5a或者JM109（你一定要確認(rèn)你的菌沒有染雜菌），轉(zhuǎn)化后涂板再篩一次轉(zhuǎn)化子，一定要挑單菌落~再提一下質(zhì)�？纯�，如果跑的膠很亮，大小也對(duì)（想做酶切驗(yàn)證也可以），就可以送測(cè)序，轉(zhuǎn)化子就可以保存?zhèn)�甘油管這樣重組質(zhì)粒就保存好了，如果想表達(dá)直接提重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化BL21就行了，順便說一句，從LZ描述的情況看，你的菌有必要做個(gè)全面篩查，我估計(jì)你保存的好多菌都不太可靠特別是BL21，實(shí)在不行就扔了問別人借一下 |
4樓2013-12-26 02:06:38
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 材料求調(diào)劑一志愿哈工大324 +8 | 閆旭東 2026-03-28 | 10/500 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 272求調(diào)劑，接受跨專業(yè)調(diào)劑！ +4 | 閑魚盧 2026-03-31 | 4/200 |
|
|
|
[考研]
 重慶大學(xué)材料與化工085600，初試370+，求求調(diào)劑建議
+5
|
shzhou_ 2026-04-01 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 333求調(diào)劑 +3 | 12138。、m?x?b 2026-03-26 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 材料求調(diào)劑 +10 | 呢呢妮妮 2026-04-01 | 13/650 |
|
|
|
[考研] 288求調(diào)劑 一志愿哈工大 材料與化工 +30 | 洛神哥哥 2026-03-31 | 30/1500 |
|
|
|
[考研] 070300化學(xué)279求調(diào)劑 +15 | 哈哈哈^_^ 2026-03-31 | 17/850 |
|
|
|
[考研] 食品學(xué)碩362求調(diào)劑 +3 | xuanxianxian 2026-04-01 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 材料與化工（0856）304求B區(qū)調(diào)劑 +8 | 邱gl 2026-03-30 | 16/800 |
|
|
|
[考研] 285求調(diào)劑 +7 | AZMK 2026-03-30 | 13/650 |
|
|
|
[考研] 一志愿南昌大學(xué)324求調(diào)劑 +7 | hanamiko 2026-03-30 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 291求調(diào)劑 +3 | 迷蒙木木 2026-04-01 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 267求調(diào)劑 +13 | uiybh 2026-03-31 | 13/650 |
|
|
|
[考研] 329求調(diào)劑，一志愿西北工業(yè)大學(xué)，材料工程（085601） +6 | 小小機(jī)靈蟲 2026-03-29 | 12/600 |
|
|
|
[考研] 江蘇蘇北高校誠(chéng)邀調(diào)劑同學(xué) +3 | zzll406 2026-03-31 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 一志愿哈爾濱工業(yè)大學(xué)材料與化工方向336分 +13 | 辰沐5211314 2026-03-26 | 13/650 |
|
|
|
[考研] 一志愿中海洋材料357 +4 | 麥恩莉. 2026-03-30 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 085404 22408 315分 +5 | zhuangyan123 2026-03-31 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 287求調(diào)劑 +17 | land xuxu 2026-03-26 | 17/850 |
|
|
|
[考研] 085701求調(diào)劑初試286分 +5 | secret0328 2026-03-28 | 5/250 |
|