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woshiguiren木蟲 (小有名氣)
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[求助]
請教,鎳柱純化蛋白后,鎳柱上的咪唑用除去嗎? 已有4人參與
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| 本人做了一段時間鎳柱蛋白純化的實驗,知道咪唑會和蛋白競爭性與鎳柱結合,從而使His-tag蛋白從鎳柱上脫離。想請教,純化結束后,結合到鎳柱上的咪唑用除去嗎?如果用,怎么除去?如果不用,那么對下一次的蛋白掛住有影響嗎?(實驗所用鎳柱為GE公司His-tag鎳柱) |

新蟲 (小有名氣)

鐵桿木蟲 (初入文壇)
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過完鎳柱后,用超純水沖沖柱子就可以,一般不會影響下次掛鎳 這樣用過幾次后就需要再生, 我們用的步驟是 1.脫鎳Buffer(含EDTA)沖洗1-2個柱體積 2.超純水沖洗3個柱體積 3.用0.5mol/L的NaOH沖洗0.5-1柱體積 4.超純水沖洗3個柱體積 5.用1M硫酸銅掛鎳 |
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