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胖胖二妮子木蟲 (小有名氣)
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[求助]
細(xì)菌熒光定量PCR溶解曲線出現(xiàn)非常接近雙峰，陰性對(duì)照總是26、27起峰
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最近剛剛開始熒光定量，做標(biāo)準(zhǔn)曲線時(shí)稀釋9個(gè)梯度，取第3-9梯度作為模板進(jìn)行熒光定量。其中高濃度（3,4,5,6）Ct結(jié)果很好，但7、8、9和陰性對(duì)照起峰均在26、27左右，且隨濃度減小Ct略微減小�？聪♂屒�時(shí)出現(xiàn)雙峰，Tm分別在85.3（高）和87（矮）左右，且隨濃度降低85.3的峰變矮而87的峰變高（最高0.06）。陰性對(duì)照中87的峰高于85.3的峰。引物用的細(xì)菌熒光定量常見引物338和518，試劑為takara，退火53和55都試過(guò)了，結(jié)果一樣。請(qǐng)問(wèn)那個(gè)87的峰可能是引物二聚體嗎？記得別人的引物二聚體貌似都沒這么高。。 開始認(rèn)為是水污染了，就重新買的DEPC水并在超凈臺(tái)里溶解引物，試劑是新買的，一直是在臺(tái)子里打開，真的不知道是哪里污染了。。求大神們幫忙~~ |
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