 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 9 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 1962 | 回復(fù): 8 | |||
[求助]
求助酶的鎳柱純化 已有3人參與
|
| 小弟最近在做酶學(xué)性質(zhì)，但一直卡在鎳柱純化這一塊，先前是蛋白掛不上去，聽各位師兄師姐的建議調(diào)低咪挫之后，蛋白掛上去了，后來用咪挫洗，跑電泳，除目的蛋白外還有少量的雜蛋白，最近一次跑交發(fā)現(xiàn)里面雜蛋白好多，簡直就是原蛋白稀釋后的，完全沒有純化出來。想請教師兄師姐，純化出來的只有目的蛋白的一條帶的是怎么弄得，謝謝。（小弟先前是這樣的，上樣：1mmol/l，平衡液10mmol/l，洗脫500mmol/l） |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
291 求調(diào)劑
已經(jīng)有5人回復(fù)
-
298-一志愿中國農(nóng)業(yè)大學(xué)-求調(diào)劑
已經(jīng)有11人回復(fù)
-
一志愿南京理工大學(xué)085701資源與環(huán)境302分求調(diào)劑
已經(jīng)有7人回復(fù)
-
316求調(diào)劑
已經(jīng)有7人回復(fù)
-
材料與化工考研調(diào)劑
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
一志愿重慶大學(xué)085700資源與環(huán)境，總分308求調(diào)劑
已經(jīng)有7人回復(fù)
-
一志愿211 初試270分 求調(diào)劑
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
08工學(xué)調(diào)劑
已經(jīng)有11人回復(fù)
-
350求調(diào)劑
已經(jīng)有6人回復(fù)
-
求調(diào)劑一志愿武漢理工大學(xué)材料工程（085601）
已經(jīng)有4人回復(fù)
» 本主題相關(guān)價(jià)值貼推薦，對您同樣有幫助:
- 鎳柱純化His標(biāo)簽蛋白，洗脫不下來
已經(jīng)有11人回復(fù)
- 求助，鎳柱純化蛋白，蛋白掛不上去
已經(jīng)有17人回復(fù)
- 鎳柱親和層析純化
已經(jīng)有6人回復(fù)
- 蛋白過鎳柱純化，在用咪唑洗脫后需要做透析，透析怎么做？？？
已經(jīng)有15人回復(fù)
- 鎳柱純化哪個(gè)牌子的好用點(diǎn)？
已經(jīng)有12人回復(fù)
- 重組大腸桿菌 鎳柱純化
已經(jīng)有5人回復(fù)
- 純化不到His-tag融合蛋白，鎳柱求教
已經(jīng)有32人回復(fù)
- 鎳柱蛋白純化，求好心人講解。
已經(jīng)有4人回復(fù)
- 鎳化的磁珠純化蛋白問題
已經(jīng)有4人回復(fù)
- 關(guān)于鎳柱純化蛋白
已經(jīng)有10人回復(fù)
- 蛋白純化鎳柱、分子篩
已經(jīng)有9人回復(fù)
- 關(guān)于帶his-tag的膜蛋白鎳柱純化
已經(jīng)有10人回復(fù)
- 鎳柱純化蛋白透析出現(xiàn)大量沉淀，請教
已經(jīng)有18人回復(fù)
- 【求助/交流】純化酶切后的膜蛋白做Western blot沒條帶，why？
已經(jīng)有9人回復(fù)
- 【求助/交流】為什么鎳柱純化可溶性蛋白，電泳結(jié)果總是顯示不純呢？
已經(jīng)有9人回復(fù)
- 【求助/交流】鎳柱純化時(shí)，咪唑洗脫液需要調(diào)pH嗎
已經(jīng)有7人回復(fù)
- 【求助/交流】鎳柱純化的蛋白保存在-20度一個(gè)星期，拿出來都是沉淀？？
已經(jīng)有19人回復(fù)
- 【求助/交流】鎳柱純化，洗不下來啊。。。
已經(jīng)有25人回復(fù)
- 基因帶六個(gè)his標(biāo)簽，蛋白純化時(shí)為何掛不上鎳柱
已經(jīng)有26人回復(fù)
fuyuandj86
版主 (著名寫手)
己所不欲，勿施于人
- BioEPI: 1
- 應(yīng)助: 397 (碩士)
- 貴賓: 0.015
- 金幣: 7576.5
- 散金: 493
- 紅花: 60
- 沙發(fā): 2
- 帖子: 1313
- 在線: 1387小時(shí)
- 蟲號: 544795
- 注冊: 2008-04-13
- 性別: GG
- 專業(yè): 生物化學(xué)
- 管轄: 生物科學(xué)
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
kx444555: 金幣+3, 鼓勵(lì)交流 2014-01-17 12:49:27
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
kx444555: 金幣+3, 鼓勵(lì)交流 2014-01-17 12:49:27
|
我一般用的咪挫是equilibration 5mM, wash 20 mM, elution 250 mM. 我假定你說的平衡液就是指wash buffer 你這個(gè)濃度應(yīng)該沒問題，但是不僅僅是濃度，還有你一般用多少體積來。如果洗的體積過多，蛋白就都洗沒了；洗的體積太少，還有雜質(zhì)。對于10ml的鎳柱，我一般不會用超過50ml wash buffer. 實(shí)在純化不出來就用鈷柱吧，比鎳柱貴，但是特異性好很多 |
2樓2014-01-16 23:39:35
3樓2014-01-16 23:54:19
4樓2014-01-17 12:53:56
5樓2014-01-17 13:18:38
6樓2014-01-17 13:19:21
7樓2014-01-17 15:29:42
acvhreinlg
銀蟲 (正式寫手)
- 應(yīng)助: 21 (小學(xué)生)
- 金幣: 230.4
- 散金: 1800
- 紅花: 7
- 帖子: 891
- 在線: 269.9小時(shí)
- 蟲號: 1896747
- 注冊: 2012-07-17
- 性別: GG
- 專業(yè): 細(xì)胞物質(zhì)運(yùn)輸
8樓2014-01-17 15:56:34
biology-girl
新蟲 (正式寫手)
- 應(yīng)助: 33 (小學(xué)生)
- 金幣: 915.7
- 散金: 23
- 紅花: 3
- 帖子: 959
- 在線: 131.6小時(shí)
- 蟲號: 2403242
- 注冊: 2013-04-06
- 性別: MM
- 專業(yè): 微生物生理與生物化學(xué)
9樓2014-06-16 09:41:12
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 wzp9012 的主題更新
| 9 | 1/1 | 返回列表 |
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 263求調(diào)劑 +6 | yqdszhdap－ 2026-03-22 | 9/450 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 306求0703調(diào)劑一志愿華中師范 +6 | 紙魚ly 2026-03-21 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 298求調(diào)劑 +8 | 上岸6666@ 2026-03-20 | 8/400 |
|
|
|
[考研]
求調(diào)劑材料學(xué)碩080500，總分289分
 5+3
|
@taotao 2026-03-19 | 21/1050 |
|
|
[考研] 070300化學(xué)求調(diào)劑 +5 | 苑豆豆 2026-03-20 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 070300，一志愿北航320求調(diào)劑 +3 | Jerry0216 2026-03-22 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 石河子大學(xué)（211、雙一流）碩博研究生長期招生公告 +3 | 李子目 2026-03-22 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 一志愿西安交通大學(xué)材料工程專業(yè) 282分求調(diào)劑 +11 | 楓橋ZL 2026-03-18 | 13/650 |
|
|
|
[考研] 289材料與化工（085600）B區(qū)求調(diào)劑 +3 | 這么名字咋樣 2026-03-22 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 287求調(diào)劑 +8 | 晨昏線與星海 2026-03-19 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 +6 | 十三加油 2026-03-21 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 考研調(diào)劑 +4 | 來好運(yùn)來來來 2026-03-21 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 0703化學(xué)調(diào)劑 +4 | 妮妮ninicgb 2026-03-21 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 085601調(diào)劑 358分 +3 | zzzzggh 2026-03-20 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 301求調(diào)劑 +10 | yy要上岸呀 2026-03-17 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 考研調(diào)劑求學(xué)校推薦 +3 | 伯樂29 2026-03-18 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑，一志愿:南京航空航天大學(xué)大學(xué) ，080500材料科學(xué)與工程學(xué)碩，總分289分 +4 | @taotao 2026-03-19 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 一志愿西安交通大學(xué) 學(xué)碩 354求調(diào)劑211或者雙一流 +3 | 我想要讀研究生 2026-03-20 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 0856調(diào)劑，是學(xué)校就去 +8 | sllhht 2026-03-19 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 招收調(diào)劑碩士 +4 | lidianxing 2026-03-19 | 12/600 |
|