 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 5 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 1982 | 回復(fù): 8 | ||
| 當前只顯示滿足指定條件的回帖，點擊這里查看本話題的所有回帖 | ||
[求助]
求助酶的鎳柱純化 已有3人參與
|
||
| 小弟最近在做酶學(xué)性質(zhì)，但一直卡在鎳柱純化這一塊，先前是蛋白掛不上去，聽各位師兄師姐的建議調(diào)低咪挫之后，蛋白掛上去了，后來用咪挫洗，跑電泳，除目的蛋白外還有少量的雜蛋白，最近一次跑交發(fā)現(xiàn)里面雜蛋白好多，簡直就是原蛋白稀釋后的，完全沒有純化出來。想請教師兄師姐，純化出來的只有目的蛋白的一條帶的是怎么弄得，謝謝。（小弟先前是這樣的，上樣：1mmol/l，平衡液10mmol/l，洗脫500mmol/l） |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
284求調(diào)劑
已經(jīng)有13人回復(fù)
-
材料科學(xué)與工程調(diào)劑
已經(jīng)有5人回復(fù)
-
346求調(diào)劑 一志愿070303有機化學(xué)
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
329求調(diào)劑
已經(jīng)有8人回復(fù)
-
一志愿南航 335分 | 0856材料化工 | GPA 4.07 | 有科研經(jīng)歷
已經(jīng)有7人回復(fù)
-
322求調(diào)劑
已經(jīng)有8人回復(fù)
-
考研調(diào)劑
已經(jīng)有5人回復(fù)
-
307求調(diào)劑
已經(jīng)有11人回復(fù)
-
292求調(diào)劑
已經(jīng)有9人回復(fù)
-
本科211生物醫(yī)學(xué)工程085409求調(diào)劑339分
已經(jīng)有3人回復(fù)
» 本主題相關(guān)價值貼推薦，對您同樣有幫助:
- 鎳柱純化His標簽蛋白，洗脫不下來
已經(jīng)有11人回復(fù)
- 求助，鎳柱純化蛋白，蛋白掛不上去
已經(jīng)有17人回復(fù)
- 鎳柱親和層析純化
已經(jīng)有6人回復(fù)
- 蛋白過鎳柱純化，在用咪唑洗脫后需要做透析，透析怎么做？？？
已經(jīng)有15人回復(fù)
- 鎳柱純化哪個牌子的好用點？
已經(jīng)有12人回復(fù)
- 重組大腸桿菌 鎳柱純化
已經(jīng)有5人回復(fù)
- 純化不到His-tag融合蛋白，鎳柱求教
已經(jīng)有32人回復(fù)
- 鎳柱蛋白純化，求好心人講解。
已經(jīng)有4人回復(fù)
- 鎳化的磁珠純化蛋白問題
已經(jīng)有4人回復(fù)
- 關(guān)于鎳柱純化蛋白
已經(jīng)有10人回復(fù)
- 蛋白純化鎳柱、分子篩
已經(jīng)有9人回復(fù)
- 關(guān)于帶his-tag的膜蛋白鎳柱純化
已經(jīng)有10人回復(fù)
- 鎳柱純化蛋白透析出現(xiàn)大量沉淀，請教
已經(jīng)有18人回復(fù)
- 【求助/交流】純化酶切后的膜蛋白做Western blot沒條帶，why？
已經(jīng)有9人回復(fù)
- 【求助/交流】為什么鎳柱純化可溶性蛋白，電泳結(jié)果總是顯示不純呢？
已經(jīng)有9人回復(fù)
- 【求助/交流】鎳柱純化時，咪唑洗脫液需要調(diào)pH嗎
已經(jīng)有7人回復(fù)
- 【求助/交流】鎳柱純化的蛋白保存在-20度一個星期，拿出來都是沉淀？？
已經(jīng)有19人回復(fù)
- 【求助/交流】鎳柱純化，洗不下來啊。。。
已經(jīng)有25人回復(fù)
- 基因帶六個his標簽，蛋白純化時為何掛不上鎳柱
已經(jīng)有26人回復(fù)
biology-girl
新蟲 (正式寫手)
- 應(yīng)助: 33 (小學(xué)生)
- 金幣: 888.7
- 散金: 23
- 紅花: 3
- 帖子: 961
- 在線: 131.6小時
- 蟲號: 2403242
- 注冊: 2013-04-06
- 性別: MM
- 專業(yè): 微生物生理與生物化學(xué)
9樓2014-06-16 09:41:12
fuyuandj86
版主 (著名寫手)
己所不欲，勿施于人
- BioEPI: 1
- 應(yīng)助: 397 (碩士)
- 貴賓: 0.015
- 金幣: 7578.5
- 散金: 495
- 紅花: 60
- 沙發(fā): 2
- 帖子: 1313
- 在線: 1387.3小時
- 蟲號: 544795
- 注冊: 2008-04-13
- 性別: GG
- 專業(yè): 生物化學(xué)
- 管轄: 生物科學(xué)
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
kx444555: 金幣+3, 鼓勵交流 2014-01-17 12:49:27
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
kx444555: 金幣+3, 鼓勵交流 2014-01-17 12:49:27
|
我一般用的咪挫是equilibration 5mM, wash 20 mM, elution 250 mM. 我假定你說的平衡液就是指wash buffer 你這個濃度應(yīng)該沒問題，但是不僅僅是濃度，還有你一般用多少體積來。如果洗的體積過多，蛋白就都洗沒了；洗的體積太少，還有雜質(zhì)。對于10ml的鎳柱，我一般不會用超過50ml wash buffer. 實在純化不出來就用鈷柱吧，比鎳柱貴，但是特異性好很多 |
2樓2014-01-16 23:39:35
3樓2014-01-16 23:54:19
4樓2014-01-17 12:53:56
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 材料科學(xué)與工程調(diào)劑 +5 | 深V宿舍吧 2026-03-30 | 5/250 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 300求調(diào)劑，材料科學(xué)英一數(shù)二 +16 | leaflight 2026-03-24 | 16/800 |
|
|
|
[考研] 085701求調(diào)劑初試286分 +5 | secret0328 2026-03-28 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 材料專碩 085600求調(diào)劑 +5 | BBQ233 2026-03-30 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 085404求調(diào)劑，總分309，本科經(jīng)歷較為豐富 +6 | 來財aa 2026-03-25 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 一志愿鄭州大學(xué)，080500學(xué)碩，總分317分求調(diào)劑 +8 | 舉個栗子oi 2026-03-24 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 0856求調(diào)劑 +13 | zhn03 2026-03-25 | 14/700 |
|
|
|
[考研] 一志愿太原理工安全工程300分，求調(diào)劑 +5 | 0857求調(diào)劑. 2026-03-24 | 6/300 |
|
|
|
[材料工程] 一志愿C9材料與化工專業(yè)總分300求調(diào)劑 +8 | 曼111 2026-03-24 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 308求調(diào)劑 +7 | 墨墨漠 2026-03-27 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 085701環(huán)境工程求調(diào)劑 +9 | 多久上課 2026-03-27 | 9/450 |
|
|
|
[有機交流]
高溫高壓反應(yīng)求助
 10+4
|
chibby 2026-03-25 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 308求調(diào)劑 +7 | 墨墨漠 2026-03-25 | 7/350 |
|
|
|
[論文投稿] Journal of Mechanical Science and Technology +3 | Russ_ss 2026-03-25 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 一志愿 本科 北科大 化學(xué) 343 +6 | 13831862839 2026-03-24 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 085601求調(diào)劑總分293英一數(shù)二 +4 | 鋼鐵大炮 2026-03-24 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 一志愿河工大 081700 276求調(diào)劑 +4 | 地球繞著太陽轉(zhuǎn) 2026-03-23 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 材料專碩 335 分求調(diào)劑 +4 | 拒絕冷暴力 2026-03-25 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 求b區(qū)院校調(diào)劑 +4 | 周56 2026-03-24 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 材料專碩找調(diào)劑 +5 | 哈哈哈吼吼吼哈 2026-03-23 | 5/250 |
|