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applin新蟲(chóng) (初入文壇)
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[求助]
關(guān)于杏仁蛋白分離的問(wèn)題
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大家好，有一個(gè)問(wèn)題，杏仁蛋白粗提液（杏仁緩沖液浸提-硫酸銨沉降-透析-粗提液），過(guò)柱子（各種填料都試過(guò)），pH9，所有蛋白一塊下來(lái)，用的是鹽濃度梯度洗脫，其中這些蛋白加了巰基乙醇做還原電泳后，電泳條帶就會(huì)分解，如一條5W就分成2W+3W的兩個(gè)條帶。杏仁蛋白液里面脂含量特別多，也給做過(guò)脂染有顯色。 不知道大家誰(shuí)有做過(guò)類(lèi)似的蛋白分離的？都是怎么分離的？ 覺(jué)得現(xiàn)在沒(méi)辦法用鹽梯度洗脫了，怎么洗都是一塊出來(lái)的，不知道大家有沒(méi)什么建議��？ 還有一點(diǎn)把蛋白粗提液脫脂｛一份蛋白液配20份脫脂液（乙醚：乙醇=3：2）｝，加了巰基乙醇，然后上樣過(guò)柱子，之后拿有OD峰的和上樣液做電泳，發(fā)現(xiàn)上樣液是5W被打斷成2條的，而洗脫液又變成2條小的重新組成5W那條大的，用的是離子交換填料UNOQ，pH9. 而且洗出來(lái)的不多，一樣是各種蛋白一塊下來(lái)，用的是0-2M的鹽梯度洗脫。 不知道巰基乙醇在過(guò)柱子過(guò)程中會(huì)怎么樣？能導(dǎo)致上柱前蛋白一樣樣，上柱后蛋白又一個(gè)樣？ 不用鹽梯度的話，大家有沒(méi)什么好的辦法推薦啊 |
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