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farther1990銅蟲 (初入文壇)
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[求助]
求助如何將蛋白和游離熒光配體分離 已有2人參與
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用熒光配體標(biāo)記蛋白，現(xiàn)在想要將溶于去污劑溶液的蛋白和熒光配體分離開來，請問使用哪種簡便便宜的分離或過濾方式能達到這種效果？跪求 ，萬分感謝各位的幫助與關(guān)注！ [ Last edited by farther1990 on 2014-2-12 at 10:23 ] |
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除去過量小分子除了離子交換柱就是透析,要么然HPLC或者ziptip之類的吸附材料. 你可以用些小點的離子交換柱嘛,比如這種:http://www.genaxxon.net/pdf/CentriSep.pdf 只有0.5ml體積, 就在2ml EP管里做. 10分鐘就完成交換. 如果就是不愿意用離子交換那可以從蛋白的tag入手,比如你蛋白上有his-tag那你就用一點點鎳柱,20-40ul就夠,在離心管里做個pulldown. 把掛柱的蛋白洗幾次,然后再用咪唑洗脫下來. 但還是要注意的是如果你的配體不是共價鍵結(jié)合,在除去過量配體的同時,配體就會解離下來. 非共價鍵結(jié)合的,除非Kd非常小, 比如biotin-streptavidin |
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