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[求助]
乳酸菌、酵母菌DNA的提取 已有1人參與
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| 最近要做乳酸菌和酵母菌DNA的提取 我是這方面的小白 希望大蝦們能給點(diǎn)詳細(xì)的提取步驟啊 后面還要PCR鑒定 希望能全面點(diǎn) 謝謝啦 |
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2樓2014-02-21 10:35:46
alimar
金蟲 (小有名氣)
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- 專業(yè): 食品科學(xué)基礎(chǔ)
【答案】應(yīng)助回帖
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1) 細(xì)菌培養(yǎng)：細(xì)菌接種于5ml液體培養(yǎng)基中，37℃搖床（300rpm）培養(yǎng)過液。 2) 細(xì)菌收集：取1ml培養(yǎng)物于1.5ml EP管中，室溫8000rpm離心5min，棄上清，沉淀重新懸浮于1ml TE（pH8.0）中（用ddH2O也行)。 3) 菌體裂解：加入6μl 50mg/ml的溶菌酶，37℃作用2h。再加2mol/L NaCl 50μl，10% SDS 110μl，20mg/ml的蛋白酶K 3μl，50℃作用3h或37℃過夜。（此時(shí)菌液應(yīng)為透明粘稠液體 4) 抽提：菌液均分到兩個(gè)1.5ml EP管，加等體積的酚∶氯仿∶異戊醇(25∶24∶1)，混勻，室溫放置5-10min。12000rpm離心10min。抽提兩次。（上清很粘稠，吸取時(shí)應(yīng)小心，最好槍頭尖應(yīng)剪去）。 5) 沉淀：加0.6倍體積的異丙醇，混勻，室溫放置10min。12000rpm離心10min。 6) 洗滌：沉淀用75%的乙醇洗滌。 7) 抽（涼）干后，溶于50μl ddH2O中，取2-5μl電泳。作PCR模板用。 自己再多看看文獻(xiàn)比較一下，最好整理出適合自己樣品的方法和步驟，加油。 |
3樓2014-02-28 13:41:43
4樓2014-03-01 13:12:05
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