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516tt新蟲(chóng) (初入文壇)
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[求助]
拖尾因子達(dá)不到要求 已有3人參與
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我在建立測(cè)定核酸的色譜條件，結(jié)果拖尾因子只有0.5左右，我嘗試了加三乙胺，調(diào)節(jié)流動(dòng)相比例，最終還換了柱子，結(jié)果如下： 我要繼續(xù)哪方面的調(diào)試呢？ |
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2014-02-24 14:23:24, 29.5 K
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【答案】應(yīng)助回帖
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516tt: 金幣+20, ★有幫助, 謝謝 2014-03-03 10:17:01
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個(gè)人建議考慮以下三方面： 1.加入磷酸鹽且調(diào)節(jié)PH值，加三乙胺和酸都應(yīng)該都不好使的，磷酸鹽體系能夠加強(qiáng)保留，加的量保證磷酸鹽在10~30mM； 2. 調(diào)節(jié)PH在2.5~7.6之間，因?yàn)楹怂嵊械入婞c(diǎn)，等電點(diǎn)下一定可以得到比較單一的峰； 3.洗脫時(shí)如果有機(jī)相是甲醇，可以換成乙腈， 4.樣品應(yīng)該考慮用酸溶解以增加溶解性； 5.開(kāi)始摸方法的時(shí)候盡量使供試品的濃度比較低，這樣容易發(fā)現(xiàn)什么色譜條件最敏感，另外考慮一下樣品的穩(wěn)定性，試驗(yàn)過(guò)程中看峰純度可以知道樣品的純度如何，峰的純度如何。 |
4樓2014-02-25 13:24:06
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