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lanlvmaomao新蟲(chóng) (初入文壇)
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關(guān)于PCR中測(cè)RNA完整性的瓊脂糖變性凝膠電泳實(shí)驗(yàn) 已有4人參與
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| 最近要做QRTPCR，RNA提取后想測(cè)下RNA完整性，RNA瓊脂糖變性凝膠電泳實(shí)驗(yàn)的方案搜索了很多用TAE TBE MOPS緩沖液的都有。筒子們誰(shuí)做過(guò)，能提供給一份詳細(xì)點(diǎn)的試驗(yàn)流程的，萬(wàn)分感謝啊 |
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gaoyang636
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lanlvmaomao
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正規(guī)做RNA電泳應(yīng)該使用MOPS緩沖液（含甲醛），而且所有的器具需用DEPC水處理，以防RNA降解，MOPS不貴，如果需要可參照分子克隆實(shí)驗(yàn)指南自己配制。如果RNA電泳只是觀察RNA是否完整，以后實(shí)驗(yàn)需要，用普通跑膠也能出來(lái)，就是用TBE了，我們也做過(guò)，沒(méi)問(wèn)題，注意器具一般清潔，跑膠時(shí)間不要太長(zhǎng)，可以的，用1.5%的膠。 |
9樓2014-02-28 09:13:23
tangqing小木
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11樓2014-02-28 09:29:09
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2樓2014-02-27 02:38:54
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實(shí)驗(yàn)步驟： (1)用1×TAE電泳緩沖液制作瓊脂糖凝膠，加1×TAE電泳緩沖液至液面覆蓋凝膠。 (2)在超凈工作臺(tái)上，用移液器吸取總RNA樣品4μl于封口膜上。在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上再加入5μl 1×TAE電泳緩沖液及1μl 的10X載樣緩沖液，混勻后，小心加入點(diǎn)樣孔。 (3)打開(kāi)電源開(kāi)關(guān)，調(diào)節(jié)電壓至100V，使RNA由負(fù)極向正極電泳，約30min后將凝膠放入EB染液中染色5min,用清水稍微漂洗。在紫外透射檢測(cè)儀上觀察RNA電泳結(jié)果。 試劑： (1)MOPS緩沖液(10*):0.4mol/L 嗎啉代丙烷磺酸(MOPS) (Ph7.0)，0.1mol/L NaAc, 10mol/L EDTA。 (2)上樣染料：50%甘油，1mmol/L EDTA ,0.4%溴酚藍(lán)，0.4%二甲苯藍(lán)。 (3)甲醛。 (4)去離子甲酰胺。v電泳槽清洗：去污劑洗干凈(一般浸泡過(guò)夜)——水沖洗——乙醇干燥——3%H2O2灌滿——室溫放置10分鐘——0.1%DEPC水沖洗。 |
7樓2014-02-27 16:14:09
lanlvmaomao
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