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[求助] PCR瓊脂糖凝膠電泳圖希望大家?guī)臀曳治鲆幌?

試劑使用量
ddH2O 36.5µl
10× EasyTaq Buffer 5μL
dNTPs 4μL
特異引物P1 1μL
特異引物P2 1μL
擬南芥、水稻cDNA模板 2μL
EasyTaq DNA Polymerase 0.5μL
總體積 50μL
PCR擴(kuò)增程序如下：95℃ 5min；（95℃ 30S；53℃ 40S；72℃ 2min）×30cycles；
72℃ 10min；4℃保溫。

PCR結(jié)果圖

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1樓 2013-10-27 11:25:39

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dongjingjia

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主要是后面幾個(gè)條帶不是很清楚，請(qǐng)問(wèn)一下大家怎么解決

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2樓2013-10-27 11:28:38

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867575969

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dongjingjia: 金幣+2, ★有幫助 2013-10-27 11:40:20
gyesang: 金幣+1, 鼓勵(lì)交流！ 2013-10-27 17:44:23

你有7個(gè)樣本嗎？可以適當(dāng)提高退火溫度試試，減少非特異性條帶。

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有些東西因?yàn)榈貌坏蕉兊妹篮茫行〇|西因?yàn)閾碛卸兊脧涀阏滟F！

3樓2013-10-27 11:36:36

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引用回帖:

3樓: Originally posted by 867575969 at 2013-10-27 11:36:36
你有7個(gè)樣本嗎？可以適當(dāng)提高退火溫度試試，減少非特異性條帶。

不是有6個(gè)樣本，只是第離maker最近的條帶沒(méi)有跑出來(lái)，前三個(gè)泳道是一個(gè)gene，中間空了一個(gè)，后三個(gè)泳道又是另一個(gè)基因，用同一臺(tái)PCR，P的，后三個(gè)不是太好，所以不知道是不是改改體系，或者其他的

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4樓2013-10-27 11:43:18

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★
gyesang: 金幣+1, 鼓勵(lì)交流！ 2013-10-28 00:53:18

改下體系引物TM值，也可能是水稻cDNA純度問(wèn)題。

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有些東西因?yàn)榈貌坏蕉兊妹篮�，有些東西因?yàn)閾碛卸兊脧涀阏滟F！

5樓2013-10-27 12:24:45

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3樓: Originally posted by 867575969 at 2013-10-27 11:36:36
你有7個(gè)樣本嗎？可以適當(dāng)提高退火溫度試試，減少非特異性條帶。

后三個(gè)要是再增加退貨溫度,我估計(jì)擴(kuò)增量應(yīng)該不會(huì)再增加很多了吧,感覺(jué)換個(gè)引物是不是更靠普

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6樓2013-10-27 21:22:48

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6樓: Originally posted by grape_vine at 2013-10-27 21:22:48
后三個(gè)要是再增加退貨溫度,我估計(jì)擴(kuò)增量應(yīng)該不會(huì)再增加很多了吧,感覺(jué)換個(gè)引物是不是更靠普...

如果有其他引物，換的試下當(dāng)然更好

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7樓2013-10-27 21:33:49

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7樓: Originally posted by 867575969 at 2013-10-27 21:33:49
如果有其他引物，換的試下當(dāng)然更好...

因?yàn)橐锒际抢蠋熢O(shè)計(jì)好的，我感覺(jué)前三個(gè)可以p出來(lái)，那么引物應(yīng)該沒(méi)什么問(wèn)題吧

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8樓2013-10-27 23:21:52

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8樓: Originally posted by dongjingjia at 2013-10-27 23:21:52
因?yàn)橐锒际抢蠋熢O(shè)計(jì)好的，我感覺(jué)前三個(gè)可以p出來(lái)，那么引物應(yīng)該沒(méi)什么問(wèn)題吧
...

我以前用12個(gè)引物跑過(guò)52個(gè)不同樣本，其中每一種引物對(duì)不同的樣本p出來(lái)的都不盡相同，另外，問(wèn)下lz你用的是一對(duì)特異性引物，是做基因克隆？

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9樓2013-10-28 10:32:50

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9樓: Originally posted by 867575969 at 2013-10-28 10:32:50
我以前用12個(gè)引物跑過(guò)52個(gè)不同樣本，其中每一種引物對(duì)不同的樣本p出來(lái)的都不盡相同，另外，問(wèn)下lz你用的是一對(duì)特異性引物，是做基因克�。�...

就是做基因克隆

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10樓2013-10-28 22:26:43

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