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悠悠米新蟲 (初入文壇)
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[求助]
C41表達(dá)重組蛋白 已有2人參與
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| 之前用pET28a連了個基因，在BL21表達(dá)，但是基本都是包涵體，這次換了C41，把之前的重組載體轉(zhuǎn)進(jìn)去，發(fā)現(xiàn)根本不長�。�！想知道怎么回事，求大神指導(dǎo)！跪謝~~~ |
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2樓2014-03-04 12:28:42
悠悠米
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3樓2014-03-07 09:05:40
4樓2014-03-07 10:37:46
悠悠米
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5樓2014-03-10 22:10:24
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★
西門吹雪170: 金幣+2, 鼓勵回帖交流 2014-03-11 13:34:36
西門吹雪170: 金幣+2, 鼓勵回帖交流 2014-03-11 13:34:36
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看你是做結(jié)構(gòu)的，你優(yōu)化的目的應(yīng)該是得到可溶表達(dá) 首先你應(yīng)該大致的分析一下導(dǎo)致包涵體的原因 C41宿主菌主要是用來表達(dá)有毒蛋白和膜蛋白的，如果你的蛋白不屬于這些類型，C41宿主的幫助不大 Origami宿主菌是氧化型的胞內(nèi)環(huán)境，主要用于帶有二硫鍵蛋白的表達(dá)，有助于形成正確的二硫鍵 你說到基本上全是包涵體，意味著可能還有一小部分的胞質(zhì)，如果有的話，建議首先嘗試降低表達(dá)溫度，總體來說，溫度對增加胞質(zhì)的貢獻(xiàn)最大。 如果沒有宿主菌可以選擇，可以嘗試更換載體，融合表達(dá)，或者優(yōu)化培養(yǎng)基（加入甘油、甜菜堿等會有些幫助的） 最后，也可以考慮一下變復(fù)性 |
6樓2014-03-11 13:09:02
慧永珍希
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7樓2014-05-08 10:09:00
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8樓2017-01-07 17:15:43
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