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小雨莎莎木蟲(chóng) (正式寫手)
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[求助]
請(qǐng)教WB方面的一些小細(xì)節(jié)問(wèn)題 已有2人參與
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| 請(qǐng)教各位高手，做WB時(shí)，濾紙的厚度會(huì)對(duì)轉(zhuǎn)膜的效率有影響么？因?yàn)榍皟商熳鯳B，用的是Bio-rad的配套的厚濾紙，濕法轉(zhuǎn)膜，10%的膠，蛋白140KD，100V恒壓，1h左右，用的是Femantas的大分子量到300KD的預(yù)染marker，70KD和100KD的marker是很清晰的，但是后來(lái)臨時(shí)換了whatman的薄濾紙，同樣還是左右各三層濾紙，相同的轉(zhuǎn)膜條件，但是marker就不見(jiàn)了，膠上也沒(méi)有，請(qǐng)問(wèn)是因?yàn)闉V紙薄所以容易轉(zhuǎn)過(guò)么？還是別的什么原因？今天重復(fù)了一次，左右兩邊放四層濾紙，勉強(qiáng)能看到一點(diǎn)點(diǎn)marker，但是封閉幾小時(shí)之后幾乎就看不到了，很是郁悶，請(qǐng)問(wèn)如何解決呢？轉(zhuǎn)膜緩沖液是常用的那種２０％甲醇的，含有ＳＤＳ的那種。謝謝啦！ |
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better8392
木蟲(chóng) (小有名氣)
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
小雨莎莎: 金幣+2, ★有幫助, 3Q 2014-03-07 18:12:12
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小雨莎莎: 金幣+2, ★有幫助, 3Q 2014-03-07 18:12:12
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我覺(jué)得濾紙的薄厚并不是影響你蛋白marker消失的原因，marker消失了，有可能是你的marker降解了，你兩次用的是同一管marker嗎？ 還有就是你不注意電極插反了，所以導(dǎo)致不管是膠上還是膜上都看不見(jiàn)。 還有就是你的轉(zhuǎn)膜緩沖液是否可以要換一下，里面有SDS可能會(huì)影響你的轉(zhuǎn)膜效率。你可以考慮用不含SDS的轉(zhuǎn)膜緩沖液。那樣轉(zhuǎn)膜的效率會(huì)高一點(diǎn)。 |
2樓2014-03-06 08:59:04
3樓2014-03-06 09:44:16
小雨莎莎
木蟲(chóng) (正式寫手)
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4樓2014-03-07 18:12:02
小雨莎莎
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5樓2014-03-07 18:12:22
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