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小雨莎莎木蟲 (正式寫手)
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[求助]
請教WB方面的一些小細(xì)節(jié)問題 已有2人參與
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| 請教各位高手，做WB時，濾紙的厚度會對轉(zhuǎn)膜的效率有影響么？因為前兩天做WB，用的是Bio-rad的配套的厚濾紙，濕法轉(zhuǎn)膜，10%的膠，蛋白140KD，100V恒壓，1h左右，用的是Femantas的大分子量到300KD的預(yù)染marker，70KD和100KD的marker是很清晰的，但是后來臨時換了whatman的薄濾紙，同樣還是左右各三層濾紙，相同的轉(zhuǎn)膜條件，但是marker就不見了，膠上也沒有，請問是因為濾紙薄所以容易轉(zhuǎn)過么？還是別的什么原因？今天重復(fù)了一次，左右兩邊放四層濾紙，勉強(qiáng)能看到一點點marker，但是封閉幾小時之后幾乎就看不到了，很是郁悶，請問如何解決呢？轉(zhuǎn)膜緩沖液是常用的那種２０％甲醇的，含有ＳＤＳ的那種。謝謝啦！ |
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3樓2014-03-06 09:44:16
better8392
木蟲 (小有名氣)
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小雨莎莎: 金幣+2, ★有幫助, 3Q 2014-03-07 18:12:12
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小雨莎莎: 金幣+2, ★有幫助, 3Q 2014-03-07 18:12:12
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我覺得濾紙的薄厚并不是影響你蛋白marker消失的原因，marker消失了，有可能是你的marker降解了，你兩次用的是同一管marker嗎？ 還有就是你不注意電極插反了，所以導(dǎo)致不管是膠上還是膜上都看不見。 還有就是你的轉(zhuǎn)膜緩沖液是否可以要換一下，里面有SDS可能會影響你的轉(zhuǎn)膜效率。你可以考慮用不含SDS的轉(zhuǎn)膜緩沖液。那樣轉(zhuǎn)膜的效率會高一點。 |
2樓2014-03-06 08:59:04
小雨莎莎
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4樓2014-03-07 18:12:02
小雨莎莎
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5樓2014-03-07 18:12:22
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