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a小孩子新蟲 (初入文壇)
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[求助]
PCR引物一大堆CG，跪求大神們支招 已有1人參與
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| 我用PET-28a載體，設(shè)計的引物序列是TTAGGATCC---ATGTGCGAGCCCGGGGACATTAC，這是mRNA,在各種數(shù)據(jù)里都找不到ATG前面的序列，用這個作為上游引物能不能P出來呀？還有其他的什么辦法能把這發(fā)夾解開嗎？跪求…………急…………謝謝各位大俠！ |
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a小孩子
新蟲 (初入文壇)
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3樓2014-03-21 16:37:09
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2樓2014-03-20 15:31:26
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【答案】應(yīng)助回帖
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西門吹雪170: 金幣+3, 鼓勵回帖交流 2014-03-22 22:40:39
西門吹雪170: 金幣+3, 鼓勵回帖交流 2014-03-22 22:40:39
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給你出個主意： 1、設(shè)計一對有突變的引物，5端帶上你要的GC，發(fā)夾結(jié)構(gòu)處適當突變一兩個堿基，3端再多加幾個互補堿基，這個就避免了發(fā)夾結(jié)構(gòu)，應(yīng)該是可以p出來，但是p出來的基因讀碼可能應(yīng)為一兩個堿基的突變而出錯（如果你考慮一下密碼子，看有沒可能設(shè)計無義突變來避免發(fā)夾）； 2、然后就是用你現(xiàn)在的引物以上一輪突變的產(chǎn)物做模板來擴增，特異性肯定很高（除了你突變的一兩個堿基，都能完全互補） ps：用簡單的模板（質(zhì)粒、純化的pcr產(chǎn)物）可以減少錯配，不用復(fù)雜的。 同是被實驗虐，這是我的經(jīng)驗，祝成功！ |
4樓2014-03-22 19:51:16
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