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mtz0305

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[求助] pcr擴(kuò)出來(lái)奇怪的條帶已有3人參與

lz近日做pcr，要擴(kuò)一條800bpr條帶，但是擴(kuò)了好多次沒(méi)有擴(kuò)出來(lái)目的條帶，但是很奇怪總是在最上邊有一條10000多bp的條帶，延伸時(shí)間才50s呀，怎么會(huì)出來(lái)這條帶呢，現(xiàn)在確認(rèn)pcr體系，模板都是沒(méi)有問(wèn)題的。做了梯度pcr也是一樣的結(jié)果。試著回收測(cè)個(gè)序，結(jié)果回收兩次都回收不到。附件里用的marker 是10000的。。同行們，幫幫忙，快糾結(jié)死了。

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是不是你的模板量加的太多了？

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2樓2014-03-20 18:28:40

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2樓: Originally posted by 鬼羽帝魂 at 2014-03-20 18:28:40
是不是你的模板量加的太多了？

100微升加1微升，擴(kuò)另一個(gè)片段擴(kuò)出來(lái)了。應(yīng)該不多吧

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3樓2014-03-20 18:50:16

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knightdream

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你的模板是什么？

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4樓2014-03-20 18:52:00

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上面這條帶肯定是模板，一般PCR肯定也擴(kuò)不出這么長(zhǎng)的條帶啊

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Theworldisnotinyourbooksandmaps,itisoutthere.

5樓2014-03-20 18:57:21

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lvbobo823

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kx444555: 金幣+2, 鼓勵(lì)交流 2014-03-20 19:54:00

你模板是不是一萬(wàn)左右，模板加多了，你把模板稀釋一千倍再做一次試試

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hehe

6樓2014-03-20 19:29:38

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3樓: Originally posted by mtz0305 at 2014-03-20 18:50:16
100微升加1微升，擴(kuò)另一個(gè)片段擴(kuò)出來(lái)了。應(yīng)該不多吧...

恩，我最近遇到的是一樣的體系條件，結(jié)果擴(kuò)不出來(lái)了，哎。

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7樓2014-03-20 20:01:18

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感覺(jué)是模板的樣子，50s的延伸不可能出來(lái)這么大的帶。另外最好是把模板濃度測(cè)一下，雖然只加了1ul，但說(shuō)不定濃度很高，所以才這么明顯

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8樓2014-03-20 20:58:25

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6樓: Originally posted by lvbobo823 at 2014-03-20 19:29:38
你模板是不是一萬(wàn)左右，模板加多了，你把模板稀釋一千倍再做一次試試

謝謝，我試試。不過(guò)我的模板是提的基因組，是5M的，有沒(méi)有是因?yàn)槭腔蚪M降解了。

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9樓2014-03-21 08:22:26

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