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wanglixia815新蟲 (正式寫手)
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[求助]
PCR的帶不清楚。。。大家?guī)兔纯磮D片，看看問(wèn)題出在哪里了。。 已有4人參與
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我是菌根的。。。最近做PCR。。共做了三次了，， 最上邊的一張圖前八個(gè)是DNA樣，后邊兩個(gè)PCR產(chǎn)品，這次用的電壓是110V，跑了30min..體系是50ul. primer 20uM 個(gè)1ul...MyTaq master Mix 25ul..DNA 6ul 和5ul..剩下的用PCR water補(bǔ)齊..電泳時(shí)加的量5ul PCR products..5 ul Orange G.. .第二張圖 其中兩個(gè)樣沒(méi)有條帶。。電壓85V。。25ul 體系。。前四個(gè)樣 primer各0.5ul (10uM)后四個(gè)樣 primer各0.5ul （20uM）..MyTaq master Mix;12.5ul, 1ul DNA 電泳 PCR products 3ul Orange G 3ul 第二張圖 。電壓85V。。25ul 體系。。 primer各0.5ul （20uM）..MyTaq master Mix;12.5ul, 1ul DNA 電泳 PCR products 2ul Orange G 2ul 我的體系設(shè)置由問(wèn)題嗎？ 還有就是我的MyTaq Master Mix...回來(lái)在室溫下呆了一天，會(huì)不會(huì)由影響。。謝謝各位了。。第一次做PCR IMG_0710.JPG |
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
gyesang: 金幣+2, 鼓勵(lì)回帖交流！ 2014-03-28 11:46:36
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從你的描述來(lái)看，PCR的體系應(yīng)該沒(méi)有問(wèn)題。 從膠圖來(lái)看，PCR的產(chǎn)物濃度應(yīng)該挺大的，你可以少上點(diǎn)樣品，或者進(jìn)行一下稀釋。 目前看來(lái)有問(wèn)題的是你的染料，你每次是等體積加入Orange G，不知道這個(gè)是為啥？慣例？還是按照說(shuō)明書來(lái)的？從你膠圖的條帶來(lái)看，比較可能的是染料加多了，加上PCR產(chǎn)物很多，所以條帶形狀不好看。 建議你首先試一下減少染料的量，你可以只添加1/2，1/4，1/8正常添加量的染料，看看PCR效果如何。 |
2樓2014-03-28 09:16:55
3樓2014-03-28 09:44:15
wanglixia815
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4樓2014-03-28 13:59:27
wanglixia815
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5樓2014-03-28 14:00:54
wanglixia815
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6樓2014-03-28 14:49:02
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8樓2014-03-29 21:10:38
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9樓2014-04-02 20:02:34
10樓2014-04-03 09:50:06
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