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笑語(yǔ)盈盈金蟲 (小有名氣)
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[交流]
RAW264.7細(xì)胞復(fù)蘇總是失敗 已有5人參與
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三周前其他實(shí)驗(yàn)室同學(xué)饋贈(zèng)一株RAW264.7,是在培養(yǎng)瓶拿過(guò)來(lái)了，養(yǎng)了兩周都很好，但是再?gòu)?fù)蘇細(xì)胞時(shí)卻總是無(wú)法成功復(fù)蘇，復(fù)蘇時(shí)先離心再培養(yǎng)的，開始狀態(tài)很正常，三個(gè)小時(shí)后百分之七十貼壁，百分之一的長(zhǎng)角（此時(shí)換一次培養(yǎng)液）；六小時(shí)后有百分之十的長(zhǎng)角，第二天就全部長(zhǎng)角了。。。求大神指點(diǎn)�。◤�(fù)蘇了三次都是這樣） |
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| 1.確定細(xì)胞凍存前狀態(tài)很好，凍存接種數(shù)量盡量多一點(diǎn)！2.復(fù)蘇前先準(zhǔn)備好離心管，1毫升凍存細(xì)胞放6-8毫升培養(yǎng)基，盡可能大量稀釋！3.從液氮罐里拿出細(xì)胞后，立即在37度水浴溶，待有綠豆大的冰塊時(shí)為宜！4.將凍存細(xì)胞稀釋輕輕吹打均勻，一般我離心3分鐘1000轉(zhuǎn)！5.離心完吹打一定要輕，機(jī)械損傷對(duì)細(xì)胞傷害很大！6.隔天觀察細(xì)胞狀態(tài)，最好換一次液！！如果你這些做的都差不多，應(yīng)該是之前細(xì)胞接種時(shí)的問(wèn)題吧~機(jī)械損傷比胰酶消化危害還大~ |
2樓2014-03-29 17:35:35
笑語(yǔ)盈盈
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3樓2014-03-30 08:24:22
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4樓2014-03-30 11:30:52
5樓2015-12-10 09:31:45
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6樓2015-12-10 15:52:36
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復(fù)蘇后狀態(tài)不好有時(shí)候也是血清的問(wèn)題，我們實(shí)驗(yàn)室之前一直用進(jìn)口的Gibico的血清，養(yǎng)的細(xì)胞培養(yǎng)一段時(shí)間后就會(huì)長(zhǎng)角，最后用的國(guó)產(chǎn)的四季青的血清，細(xì)胞狀態(tài)才穩(wěn)定，但并不是說(shuō)國(guó)產(chǎn)的就好，國(guó)產(chǎn)的血清批次不同的話對(duì)細(xì)胞的效果也是很不同的。個(gè)人經(jīng)驗(yàn)只是一說(shuō)、、、、 |
7樓2015-12-10 18:58:53
芳荷戀雨
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8樓2015-12-14 15:29:05
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