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笑語盈盈金蟲 (小有名氣)
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[交流]
RAW264.7細(xì)胞復(fù)蘇總是失敗 已有5人參與
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三周前其他實(shí)驗(yàn)室同學(xué)饋贈(zèng)一株RAW264.7,是在培養(yǎng)瓶拿過來了，養(yǎng)了兩周都很好，但是再復(fù)蘇細(xì)胞時(shí)卻總是無法成功復(fù)蘇，復(fù)蘇時(shí)先離心再培養(yǎng)的，開始狀態(tài)很正常，三個(gè)小時(shí)后百分之七十貼壁，百分之一的長角（此時(shí)換一次培養(yǎng)液）；六小時(shí)后有百分之十的長角，第二天就全部長角了。。。求大神指點(diǎn)�。◤�(fù)蘇了三次都是這樣） |
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笑語盈盈
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3樓2014-03-30 08:24:22
★
小木蟲: 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
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| 1.確定細(xì)胞凍存前狀態(tài)很好，凍存接種數(shù)量盡量多一點(diǎn)！2.復(fù)蘇前先準(zhǔn)備好離心管，1毫升凍存細(xì)胞放6-8毫升培養(yǎng)基，盡可能大量稀釋！3.從液氮罐里拿出細(xì)胞后，立即在37度水浴溶，待有綠豆大的冰塊時(shí)為宜！4.將凍存細(xì)胞稀釋輕輕吹打均勻，一般我離心3分鐘1000轉(zhuǎn)！5.離心完吹打一定要輕，機(jī)械損傷對(duì)細(xì)胞傷害很大！6.隔天觀察細(xì)胞狀態(tài)，最好換一次液！！如果你這些做的都差不多，應(yīng)該是之前細(xì)胞接種時(shí)的問題吧~機(jī)械損傷比胰酶消化危害還大~ |
2樓2014-03-29 17:35:35
jby2006
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4樓2014-03-30 11:30:52
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