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[求助] 測蘋果CAT酶活性已有1人參與

今天測CAT酶活性，使用0.1M PH7.5的磷酸緩沖液，提取液是用77mgDTT和5%pvpp混合定容至100ml.最后測定使用20mmol的過氧化氫溶液加上100微升酶提取液。吸光值一直不變。。。。。保持一個值為什么？？？？？是什么原因啊？？？！�。∏蟠笊窠獯�

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1樓 2014-03-31 22:54:36

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酶提取液就用PBS+pvp就好
酶失活的可能很多，在實驗中盡量注意，比如提取液要預冷，研磨使用液氮或在冰上進行，離心要4度，混勻不能太劇烈，等等等

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8樓2014-04-03 09:29:14

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【答案】應助回帖

感謝參與，應助指數 +1

lz是用測定過氧化氫的殘余量來判定的吧，比色皿是用的石英的嗎？過氧化氫過期了嗎？

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2樓2014-04-01 14:55:00

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2樓: Originally posted by 小毛孩24 at 2014-04-01 14:55:00
lz是用測定過氧化氫的殘余量來判定的吧，比色皿是用的石英的嗎？過氧化氫過期了嗎？

過氧化氫沒過期，比色mi是石英的，第一次做，為什么說我是測過氧化氫殘余量呢？按理說吸光值應該一直下降。。。。我的真是不知道怎么回事

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3樓2014-04-02 10:54:20

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小小魚淚了: 金幣+5, ★★★★★最佳答案, 很好啊，真的很感謝 2014-04-03 10:53:07

我仔細看了你的反應體系，lz應該再確定下反應體系中各成分的含量
1、DTT，會還原酶的二硫鍵，此處可以不加
2、過氧化氫濃度，生化實驗書上的反應體系是3ml 15mM過氧化氫 + 0.1 ml酶液，你加20mmol過氧化氫太多太多了
3、提取的酶的濃度是否合適，提取過程是否使酶失活
lz問為什么說是測定的過氧化氫殘余量，看來lz還沒有搞清楚實驗原理。

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4樓2014-04-02 12:15:19

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4樓: Originally posted by 小毛孩24 at 2014-04-02 12:15:19
我仔細看了你的反應體系，lz應該再確定下反應體系中各成分的含量
1、DTT，會還原酶的二硫鍵，此處可以不加
2、過氧化氫濃度，生化實驗書上的反應體系是3ml 15mM過氧化氫 + 0.1 ml酶液，你加20mmol過氧化氫太多太多 ...

剛剛又看了實驗書，確實是檢測過氧化氫含量，請問一下，實驗過程中哪些情況會導致酶失活呢。。。？？？

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5樓2014-04-02 21:22:32

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引用回帖:

DDT不加，我用什么當提取液呢？？？pvpp和磷酸緩沖液么

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6樓2014-04-02 21:25:31

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DTT不加，我用什么當提取液呢？？？pvpp和磷酸緩沖液么

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7樓2014-04-02 21:28:15

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8樓: Originally posted by 小毛孩24 at 2014-04-03 09:29:14
酶提取液就用PBS+pvp就好
酶失活的可能很多，在實驗中盡量注意，比如提取液要預冷，研磨使用液氮或在冰上進行，離心要4度，混勻不能太劇烈，等等等

我直接是冰浴勻漿。。。我感覺藥品什么都沒問題。。。。問題應該出在酶提取上。。。

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9樓2014-04-03 10:52:05

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3樓正解酶活用紫外是個細致活。你可以嘗試一下電泳

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10樓2014-04-03 11:00:54

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