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lwk5716鐵桿木蟲 (正式寫手)
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[求助]
如何確定一段序列中那一部分是啟動子 已有3人參與
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各位前輩大家好：我先一個問題感到不解，我通過抑制差減雜交獲得了一段基因的序列，并且在網(wǎng)上和其同源序列比對，發(fā)現(xiàn)開放閱讀框是拿到了，3'末端到了polyA，5'末端到了ATG之前的幾個堿基。我用那這段序列和數(shù)據(jù)庫比對找到了對應了DNA序列，并且有了ATG前面的6Kb多的序列，但我不知道啟動子具體是哪部分，轉(zhuǎn)錄起始點是哪里？請問各位前輩有沒有什么軟件或者網(wǎng)站可以預測�。炕蛘哂袥]有什么分子生物學手段進行研究，我想知道它受哪類轉(zhuǎn)錄因子調(diào)控。謝謝各位前輩了。 |
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lwk5716
鐵桿木蟲 (正式寫手)
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5樓2014-04-02 09:54:26
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你這個是經(jīng)典的啟動子mapping實驗 很簡單，你可以搞一個報告基因系統(tǒng)，Luciferase、CAT、甚至來個GFP也行。 然后找一個沒有啟動子的表達載體，Luciferase系統(tǒng)的就是pGL3-Basic應該 再把你懷疑有啟動子活性的片段裝進去 檢測下游報告基因是否表達 用這個系統(tǒng)，你可以通過不斷的做deletion，找到你這段長序列里面的核心啟動子 看看《分子克隆》第三版，有這些內(nèi)容很詳細的說明 |
2樓2014-04-01 20:30:22
★
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3樓2014-04-01 23:55:30
lvbobo823
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4樓2014-04-02 07:28:02
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