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lavender2056新蟲(chóng) (初入文壇)
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關(guān)于構(gòu)建載體時(shí)加裝內(nèi)含子編碼基因 已有1人參與
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| 用哺乳動(dòng)物細(xì)胞中的載體來(lái)表達(dá)外源的真核生物的基因時(shí)，通常需要在載體上加裝編碼內(nèi)含子的序列，但是真核生物的基因序列上通常都含有自己的內(nèi)含子，為什么載體上還要再裝？ |
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biostar2009
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【答案】應(yīng)助回帖
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你注意到了一個(gè)有趣的現(xiàn)象，但是又忽視了一個(gè)簡(jiǎn)單的概念！ 一般而言，用載體表達(dá)一個(gè)基因，就是把這個(gè)基因的CDS區(qū)，或者你感興趣的某一段CDS區(qū)，裝到一個(gè)真核表達(dá)載體。所謂真核表達(dá)載體，就是有真核表達(dá)元件的一個(gè)質(zhì)粒，一般有個(gè)啟動(dòng)子，還有個(gè)polyA信號(hào)。這樣就可以實(shí)現(xiàn)這個(gè)基因的外源表達(dá)了。 正如你注意到的，真核生物基因一般都有很多內(nèi)含子。這些內(nèi)含子是真核生物mRNA表達(dá)的一個(gè)重要部分，雖然它們并不參與最終蛋白的編碼，但是幾乎參與pre-mRNA核內(nèi)加工的很多步驟，而且這些步驟都是以耦連的方式發(fā)生的。 比如內(nèi)含子的去除就與mRNA的出核相關(guān)，因?yàn)榧艚拥倪^(guò)程中很多結(jié)合到這段mRNA的很多蛋白是出核必須的。也就是說(shuō)，如果一段RNA沒(méi)有內(nèi)含子，沒(méi)有剪接這個(gè)過(guò)程，就很不容易出核。 這一點(diǎn)，正是外源表達(dá)的CDS的一個(gè)問(wèn)題。這些強(qiáng)啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)了大量的mRNA表達(dá)，但是出核的比例卻相比內(nèi)源基因低非常多，等于說(shuō)是降低了最終表達(dá)蛋白的能力。 所以，很多“考究”的真核表達(dá)載體，會(huì)有一段稱(chēng)為IVE的序列，這個(gè)是intron的早期另一個(gè)叫法，這個(gè)序列來(lái)自非常清楚的基因的內(nèi)含子，也就是說(shuō)，從哪到哪會(huì)被剪接，非常清楚，不會(huì)擔(dān)心傷害到有用的序列。 通過(guò)這么一個(gè)IVE，讓這些RNA經(jīng)歷一下剪接，可以極大的促進(jìn)他們的出核，也就可以增大最終蛋白合成的水平。 你可以找些材料繼續(xù)學(xué)習(xí)。 |
2樓2014-04-03 19:21:55
阿粥333
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3樓2020-07-01 16:20:37
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