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lavender2056新蟲 (初入文壇)
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關(guān)于構(gòu)建載體時加裝內(nèi)含子編碼基因 已有1人參與
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| 用哺乳動物細胞中的載體來表達外源的真核生物的基因時，通常需要在載體上加裝編碼內(nèi)含子的序列，但是真核生物的基因序列上通常都含有自己的內(nèi)含子，為什么載體上還要再裝？ |
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 分子生物學(xué)技術(shù) |
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biostar2009
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【答案】應(yīng)助回帖
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kx444555: 金幣+3, 鼓勵交流 2014-04-03 21:27:03
gyesang: MolEPI+1, 專業(yè)！ 2014-04-04 00:20:48
lavender2056: 金幣+5, ★★★★★最佳答案 2014-04-05 13:53:32
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lavender2056: 金幣+5, ★★★★★最佳答案 2014-04-05 13:53:32
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你注意到了一個有趣的現(xiàn)象，但是又忽視了一個簡單的概念！ 一般而言，用載體表達一個基因，就是把這個基因的CDS區(qū)，或者你感興趣的某一段CDS區(qū)，裝到一個真核表達載體。所謂真核表達載體，就是有真核表達元件的一個質(zhì)粒，一般有個啟動子，還有個polyA信號。這樣就可以實現(xiàn)這個基因的外源表達了。 正如你注意到的，真核生物基因一般都有很多內(nèi)含子。這些內(nèi)含子是真核生物mRNA表達的一個重要部分，雖然它們并不參與最終蛋白的編碼，但是幾乎參與pre-mRNA核內(nèi)加工的很多步驟，而且這些步驟都是以耦連的方式發(fā)生的。 比如內(nèi)含子的去除就與mRNA的出核相關(guān)，因為剪接的過程中很多結(jié)合到這段mRNA的很多蛋白是出核必須的。也就是說，如果一段RNA沒有內(nèi)含子，沒有剪接這個過程，就很不容易出核。 這一點，正是外源表達的CDS的一個問題。這些強啟動子驅(qū)動了大量的mRNA表達，但是出核的比例卻相比內(nèi)源基因低非常多，等于說是降低了最終表達蛋白的能力。 所以，很多“考究”的真核表達載體，會有一段稱為IVE的序列，這個是intron的早期另一個叫法，這個序列來自非常清楚的基因的內(nèi)含子，也就是說，從哪到哪會被剪接，非常清楚，不會擔(dān)心傷害到有用的序列。 通過這么一個IVE，讓這些RNA經(jīng)歷一下剪接，可以極大的促進他們的出核，也就可以增大最終蛋白合成的水平。 你可以找些材料繼續(xù)學(xué)習(xí)。 |
2樓2014-04-03 19:21:55
阿粥333
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3樓2020-07-01 16:20:37
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