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zzl2516金蟲(chóng) (小有名氣)
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[求助]
PCR后電泳問(wèn)題 已有5人參與
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| 最近一次PCR出現(xiàn)了令人費(fèi)解的問(wèn)題，PCR之后的產(chǎn)物跑電泳跑了兩次都是沒(méi)有條帶，但是marker很清晰，但是產(chǎn)物用nanodrop測(cè)定結(jié)果顯示濃度是600多ng/μL，而且純度還挺高。。。。有人遇到過(guò)這種情況么。。。這樣的情況是P出來(lái)還是沒(méi)P出來(lái)啊。。。 |
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j2
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
zzl2516(西門(mén)吹雪170代發(fā)): 金幣+3, 鼓勵(lì)回帖交流 2014-04-07 18:08:42
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zzl2516(西門(mén)吹雪170代發(fā)): 金幣+3, 鼓勵(lì)回帖交流 2014-04-07 18:08:42
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概念太不清楚了 PCR產(chǎn)物，不純化，直接測(cè)濃度有什么意義？ 或者說(shuō)，如果你測(cè)過(guò)沒(méi)有開(kāi)始P的和P完之后的，如果濃度降低，哈哈，那有可能出產(chǎn)物了。 用光吸收的方法測(cè)濃度，根本分不清楚dNTP，或者free-primer，還是你PCR得到的primer dimer， nonspecific bands或者你的產(chǎn)物。 而且，原理上說(shuō)，dNTP的光吸收最高，這個(gè)封閉系統(tǒng)如果P出東西來(lái)了，光吸收還應(yīng)該下降。 |
5樓2014-04-07 15:12:57
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