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梁贏木蟲 (正式寫手)
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[求助]
想請教一個100*Mg++溶液是什么意思？怎么配制？有點(diǎn)小急，，謝了 已有2人參與
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| 各位高手:本人在做大腸的感受態(tài)的時候，要用到這個溶液，現(xiàn)在并不知道怎么配制？有做過的 請多多指教，本人感激不盡��！3Q |
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3樓2014-04-13 17:12:36
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樓上說的對，100*就是100倍的意思，就是鎂鹽母液的濃度（有些藥品用量大，或者濃度低，為了確保準(zhǔn)確，就配制成濃縮的母液，用的時候稀釋了用）。我們做感受替俺是是這樣做的，其中SOB培養(yǎng)液用LB代替，沒事區(qū)別。祝好運(yùn)！ 實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備：100ml離心管，50ml刻度管，1.5ml離心管，SOB溶液, TB 步驟：（注意：整個實(shí)驗(yàn)所有水都必須使用ddH2O） 1. LB板(無抗生素)，劃線DH5α，37°倒置培養(yǎng)過夜 2. 挑10-15個單克隆到250ml SOB溶液中（已加MgCl2 和MgSO4,在1 L錐形瓶），20°，250rpm搖到OD600＝0.35-0.45 3. 冰上放置10mins 4. 4°，5000rpm，8mins 5. 棄上清，用80ml冰冷的TB輕輕地在冰上懸浮 6. 冰上放置10mins 7. 4°，4000rpm，8mins 8. 棄上清，用20ml冰冷的TB輕輕地在冰上懸浮 9. 加1.5ml DMSO，混勻 10. 分裝。每個預(yù)冷的1.5ml離心管加150-200ul 11. 液氮冷凍，-80°保存 試劑配方： SOB液體培養(yǎng)基 (490ml) Tryptone 10g Yeast Extract 2.5g NaCl 0.2922g KCl 0.0932g 調(diào)pH7.0, 每個1L錐形瓶分裝245ml,滅菌 使用前加入已滅菌的2.5ml 1M MgCl2和2.5ml1M MgSO4 TB 溶液 MW 濃度 （1L） （250ml） PIPES： 335.37 10mM 3.3537g 0.8384g CaCl2: 147.02 15mM 2.2053g 0.5513g KCl: 74.55 250mM 18.6375g 4.6594g Dissolve completely and adjust pH to 6.7 with KOH MnCl2 197.91 55mM 10.8851g 2.7213g Filtration through a 0.45um filter and store at 4° |
4樓2014-04-13 17:21:18
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