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新版西游記木蟲 (著名寫手)
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[求助]
關(guān)于Rosetta(DE3)菌株用來做蛋白表達(dá)的相關(guān)問題。 已有2人參與
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Rosetta(DE3)菌株相較于其他表達(dá)菌株，如BL21(DE3)，搖菌時間長才能達(dá)到OD要求。那么質(zhì)粒轉(zhuǎn)化Rosetta后，挑菌后應(yīng)該怎么活化？氨芐青霉素和氯霉素的濃度？搖菌時間？等等。本人有一個蛋白，稀有密碼子較多，還有兩個連續(xù)排在一起的，所以使用Rosetta，問題是要么搖菌搖不起來，要么是耗時很長，大概17h，然后做小量誘導(dǎo)表達(dá)沒有目的蛋白。 不完全統(tǒng)計，這個蛋白已經(jīng)耗費(fèi)我好幾個月了，還沒有進(jìn)展，覺得生活好沒有希望啊。。。 |
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4樓2014-05-06 11:30:23
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
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使用雙抗性是會對菌株的生長有影響，你可以嘗試將抗生素的濃度都減半 不過實(shí)際操作的時候沒有感覺到Rosseta長的有多慢啊 你還可以嘗試使用1/3濃度的抗生素，只要保證是雙抗性就行 還有就是，你需要轉(zhuǎn)化一下BL21的菌株，看看轉(zhuǎn)化后是不是也長的很慢或者不好，如果是這樣的話，可能是你要表達(dá)的蛋白有毒或者能抑制大腸桿菌生長 |
2樓2014-04-14 10:47:50
3樓2014-04-14 11:59:32
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