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小木蟲論壇-學術科研互動平臺 » 生物醫(yī)藥區(qū) » 微生物 » 實驗/技術 » 酶活測定和標準曲線
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zhou325912銅蟲 (小有名氣)
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[求助]
酶活測定和標準曲線 已有1人參與
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現測定有一種胞內酶（作用底物產銨根離子）的酶活，步驟如下： 繪制標準曲線：稱取過夜干燥的硫酸銨0.66g，定容到100ml.也就是100mmol/L的銨根離子，然后以此為原液，配制0.5、1、1.5、2、2.5umol/mL的梯度液，取250uL的標準梯度液先在37℃放置20min，再加顯色劑I和II各500uL。再在37℃放置20分鐘顯色。測OD，以OD為縱坐標，銨根離子為橫坐標。然后做出標準曲線。 酶活測定：取1ml發(fā)酵液，緩沖液洗兩次之后，再加500uL的緩沖液重懸，因底物能夠進入細胞，所以可以直接測定，取10uL重懸液稀釋到50uL，再加200uL過量的底物。先在37℃反應20min，再加顯色劑I和II各500uL。再在37℃放置20分鐘顯色。測OD，然后換算酶活。 問題是：1.這樣測出來的標準曲線的銨根離子的單位是umol/mL還是umol 2.換算成1ml發(fā)酵液的酶活的話該怎么換算，也就是多少U/mL，小弟最近被這個問題搞暈了，一直困惑，希望能有人指點指點，小弟不勝感激�。�！ |
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laozuzunzhe
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