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3‘RACE序列比對(duì)了居然是26S核糖體RNA基因 這是怎么回事 求指點(diǎn) �。。。�！萬分感謝 已有4人參與
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應(yīng)用CloneTech Smart RACE試劑盒做3’RACE 應(yīng)用試劑盒的UPM引物基因特異性引物 退火58度 延伸2min 得到了750bp 和300bp 的條帶 測(cè)序 結(jié)果都是26S核糖體RNA基因 ，不是我要的基因序列 請(qǐng)問我到底哪里出了錯(cuò)？ |
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Neo2000
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3樓2014-04-23 16:05:34
biostar2009
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
gyesang: 金幣+2, 鼓勵(lì)回帖交流！ 2014-04-23 17:34:18
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仔細(xì)分析你得到的序列，你找到了非模板A么？ 看看這個(gè)： http://www.gaoyang168.com/bbs/viewthread.php?tid=7194592 |
2樓2014-04-23 16:01:45
4樓2014-04-23 16:34:30
karin
木蟲 (小有名氣)
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我最近也在用CloneTech Smart RACE試劑盒做5’RACE ，換了若干引物，用的touch-down PCR，測(cè)了若干2kb、1kb、750bp、500bp條帶，都是核糖體28s，18s，5.8s基因簇里的片段。后來我拿自己的基因和這個(gè)基因簇對(duì)比了一下，確實(shí)有相似度高的部分，后來就選擇相似度低的部分設(shè)計(jì)特異引物，目前正在做，反正不再出以前那些明顯不對(duì)的條帶了。 你可以也比對(duì)一下，是不是和我的情況類似呢，還有就是設(shè)計(jì)特引物的時(shí)候選擇Tm值高的，以便做touch-down PCR。當(dāng)參考吧，祝你早日成功！  |
5樓2014-04-24 11:11:33
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