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小木蟲論壇-學術科研互動平臺 » 生物醫(yī)藥區(qū) » 分子生物 » PCR相關 » 平端酶切連接
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20083630zhan木蟲 (正式寫手)
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[求助]
平端酶切連接 已有3人參與
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用Sma1、Xho1雙酶切載體和 目的片段，然后連接，但是連了幾次總是連不上，各位蟲友有木有遇到相似的情況啊，求指教啊 |
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【答案】應助回帖
★ ★ ★
感謝參與，應助指數(shù) +1
20083630zhan(西門吹雪170代發(fā)): 金幣+3, 鼓勵回帖交流 2014-04-28 19:52:25
感謝參與，應助指數(shù) +1
20083630zhan(西門吹雪170代發(fā)): 金幣+3, 鼓勵回帖交流 2014-04-28 19:52:25
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1、你加T4連接酶可以多加點（1微升），連接時間可以延長點（一般4度過夜） 2、如果上面方法不適用，那就用必殺技，就是：你先提高酶切質(zhì)粒和酶切目的片段濃度，確認全切開后，T4連接酶連接過夜，然后跑膠，你會看見不同的幾條帶，有自連的，有沒連接上的目的片段和載體片段，有你需要連接有目的片段的載體，然后根據(jù)你的bp量大小，膠回收所需條帶，再轉(zhuǎn)染感受態(tài)，涂板，培養(yǎng)。 希望對你有幫助。 |
2樓2014-04-28 11:05:12
zep616745243
銀蟲 (小有名氣)
- 應助: 32 (小學生)
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3樓2014-04-28 15:18:44
Neo2000
木蟲 (著名寫手)
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4樓2014-04-28 19:00:03
5樓2016-11-16 09:53:56
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