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北京石油化工學(xué)院2026年研究生招生接收調(diào)劑公告

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yhh狙擊手新

金蟲 (初入文壇)

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[求助] 原核表達(dá)載體構(gòu)建已有2人參與

構(gòu)建原核表達(dá)載體過程中的問題：
   PCR得到的基因比目的基因稍大？
   膠回收后的目的片段較弱？
   連接轉(zhuǎn)化效率不高，對(duì)照組轉(zhuǎn)化效率很好？

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【求助/交流】原核表達(dá)載體pGEX-4T-1對(duì)應(yīng)的表達(dá)菌株已經(jīng)有6人回復(fù)

我的青春我做主

1樓 2014-04-29 15:22:30

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西門吹雪170

榮譽(yù)版主 (職業(yè)作家)

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【答案】應(yīng)助回帖

★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
yhh狙擊手新(myprayer代發(fā)): 金幣+1, 贈(zèng)人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-04-29 21:15:49

1、PCR得到的基因比目的基因稍大？這個(gè)可以通過克隆進(jìn)行測(cè)序進(jìn)行鑒定。
2、膠回收后的目的片段較弱？這個(gè)一般都是這種情況，不影響。
3、連接轉(zhuǎn)化效率不高，對(duì)照組轉(zhuǎn)化效率很好？可能目的基因與載體的連接效率低。

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植根于內(nèi)心的修養(yǎng)；無需提醒的自覺；以約束為前提的自由；為別人著想的善良

2樓2014-04-29 18:09:35

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meng_xu

銅蟲 (小有名氣)

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【答案】應(yīng)助回帖

感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1

1.可以測(cè)序，agarose跑出來有時(shí)候也不是特別準(zhǔn)確

2.回收效率也就一半左右，起始的DNA量最好夠高，而且，回收過柱子前，一般情況下，我加3-5ul的3M NaOAc，確保pH比較低，這樣可以提高柱子的DNA結(jié)合效率

3.電轉(zhuǎn)還是化學(xué)轉(zhuǎn)？連接的轉(zhuǎn)化菌落數(shù)一般來說要低于質(zhì)粒的對(duì)照的，這個(gè)也很正常，不過只要有一個(gè)正確的就夠了，對(duì)吧？

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回復(fù)此樓

3樓2014-04-30 05:49:26

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