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qiushuimeng新蟲 (著名寫手)
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[求助]
已知一個(gè)啟動子序列，怎么知道它是否為特異性的？ 已有5人參與
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| 如題，已經(jīng)獲得一個(gè)啟動子了，想知道它是否為特異性，是通過信息學(xué)分析呢還是通過實(shí)驗(yàn)？請各位大俠幫幫我這個(gè)毫無頭緒的初學(xué)者吧？學(xué)的太差，請大家別笑話！謝謝！ |
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額，這個(gè)是一種思路，不過問題在于，你的啟動子序列是不表達(dá)的啊。事實(shí)上，各個(gè)組織器官的cdna基本上涵蓋了該植物大部分的蛋白表達(dá)，除了個(gè)別特異性的以外，所以容易出現(xiàn)一個(gè)問題就是，你的這個(gè)啟動子如果不是非常特異的在某個(gè)組織表達(dá)（比如控制花粉），那么可能會在很多組織都檢測出來。 一般我們都會選擇主動出擊，就是我說的那種克隆或轉(zhuǎn)染。 當(dāng)然，在這之前，你的方案是個(gè)很好而且很簡單的思路，比較快捷 如果運(yùn)氣好的話，剛好非常特異，那你就中獎了哈 |
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qiushuimeng6樓2014-05-08 22:36:05
7樓2014-05-09 03:32:13
wizardfan
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8樓2014-05-09 04:37:25
【答案】應(yīng)助回帖
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如果是想做表達(dá)譜分析，建議克隆啟動子序列，然后加上GUS報(bào)告基因，將載體轉(zhuǎn)染你的植物，然后通過檢測GUS的活性，可以具體看哪個(gè)組織，生長發(fā)育時(shí)期的特異性表達(dá)。其實(shí)研究啟動子的方法有很多，比如酵母單雜，找蛋白與啟動子結(jié)合的特異性，EMSA研究蛋白具體 與那幾個(gè)特異堿基結(jié)合，promoter序列比對，肯定會有信息的，那種的box啊elements啊，或者其他的。 |
9樓2014-05-09 10:30:22
zzyzeus
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qiushuimeng
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4樓2014-05-08 17:26:19
qiushuimeng
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假如是某個(gè)植物中的啟動子，然后想知道它是不是組織特異性，比如是否只在胚珠中表達(dá)，可否通過反轉(zhuǎn)錄得到這個(gè)植株的各個(gè)組織器官的CDNA，然后擴(kuò)這個(gè)基因的CDS中某個(gè)片段，若P出來了就是說明此基因表達(dá)了，也就是此啟動子發(fā)揮作用了？我對這方面不是很明白，有點(diǎn)迷糊，請指教，謝謝了 5樓2014-05-08 17:37:01
qiushuimeng
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10樓2014-05-09 17:57:40
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