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泡菜肉絲

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[求助] PCR小片段出不來(lái) 已有2人參與

最近新訂兩對(duì)了引物，做PCR，四百多的條帶出來(lái)了，一百多的條帶怎么也出不來(lái)，試過(guò)梯度的，也沒(méi)出來(lái)，模版和四百多的是一樣的，只不過(guò)P的片段不一樣，理論上很好P的呀，所以糾結(jié)了，求指點(diǎn)，謝謝。

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1樓 2014-05-10 18:28:41

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泡菜肉絲

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4樓: Originally posted by mehongyu at 2014-05-13 16:06:07
確定引物序列的準(zhǔn)確性了嗎？照常理來(lái)說(shuō)100多的不可能出不來(lái)，或者是不是膠濃度太低，片段和引物二聚體沒(méi)有分開(kāi)。

嗯，序列沒(méi)有問(wèn)題，可是在100bp以下有淡淡的條帶，應(yīng)該是引物二聚體，1%的膠，膠濃度有很大影響嗎？一點(diǎn)點(diǎn)都看不到。下次試下2%的看看吧。謝謝

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5樓2014-05-13 16:46:45

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天使托

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泡菜肉絲(西門吹雪170代發(fā)): 金幣+1, 鼓勵(lì)回帖交流 2014-05-10 22:11:39

可以嘗試調(diào)節(jié)一下退火溫度和延伸時(shí)間，另外配膠時(shí)可以增加瓊脂糖濃度試一下。

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2樓2014-05-10 21:21:03

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引用回帖:

2樓: Originally posted by 天使托 at 2014-05-10 21:21:03
可以嘗試調(diào)節(jié)一下退火溫度和延伸時(shí)間，另外配膠時(shí)可以增加瓊脂糖濃度試一下。

嗯，溫度調(diào)整過(guò)了，沒(méi)用，其他試試吧，謝謝

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3樓2014-05-10 21:22:49

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mehongyu

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gyesang: 金幣+2, 鼓勵(lì)回帖交流！ 2014-06-01 16:55:36

確定引物序列的準(zhǔn)確性了嗎？照常理來(lái)說(shuō)100多的不可能出不來(lái)，或者是不是膠濃度太低，片段和引物二聚體沒(méi)有分開(kāi)。

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4樓2014-05-13 16:06:07

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