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求助，PCR總是P不出條帶�。∏蟠笊� 已有1人參與
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背景-------我是做的野生動物微衛(wèi)星遺傳多樣性研究，提取的DNA是從糞便用試劑盒提取的，瓊脂糖電泳條帶都在2000kb以上，且大部分比較亮。引物是從外文文獻(xiàn)上拿來直接用的。Taq酶，buffer這些也都是新買的，試劑上面應(yīng)該沒什么問題。 PCR體系用12.5微升體系： buffer：1.25 dNTP：1.25 taq酶：0.1 F：1 R：1 DNA：1.5 dd水：6.4 問題來了，用引物1在這個體系下，用八個DNA來分別作溫度梯度PCR，只有一個DNA能P出來?xiàng)l帶，且在三個溫度下都有條帶，然后用另一個在這個體系下沒出條帶的DNA，只是把DNA模板量調(diào)到0.5微升，其他不變，結(jié)果就能P出來，這就是不是說明DNA模板量濃度不同，每個DNA都要對應(yīng)一個需加入的模板量么？？也就是說每個DNA都要對應(yīng)一個體系么？？？？ 那么，我的DNA有將近二百個樣，每個DNA都要摸索一下要加的模板量的話，還能畢業(yè)么？怎么辦��？？老師讓我測一下DNA濃度，大概0.15微克每微升，用同一個DNA測兩次的時候，兩次讀數(shù)相差不小，是儀器的問題還是沒混勻啊？應(yīng)該怎么混勻呢，我都是吹打五十次左右的。怎么辦？求大神指點(diǎn)啊。。。。 |
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2樓2014-06-26 14:12:02
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