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ruchang2013鐵蟲(chóng) (初入文壇)
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[求助]
這是重組后的驗(yàn)證 已有1人參與
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這是pTKIP-cat與一段2.3kb的核酸片段做的重組工作，圖為PCR驗(yàn)證及酶切驗(yàn)證。 IP1/glk2、galP1/IP2這2對(duì)引物，若重組成功，應(yīng)該有1.5kb左右的條帶，顯然這樣大小的條帶不存在，說(shuō)明重組失敗，那為什么會(huì)存在大條帶？ “對(duì)”為pTKIP-cat,若重組成功，重組質(zhì)粒是7kb 2014.0427 17菌PCR酶切.png |
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luwei13566
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
ruchang2013(西門(mén)吹雪170代發(fā)): 金幣+2, 鼓勵(lì)回帖交流 2014-05-12 17:58:15
ruchang2013: 金幣+3, 謝謝，是不是酶切時(shí)間也過(guò)短��！我這次將質(zhì)粒重新酶切觀察到2條帶，一條在3kb~5kb,另一條帶在2kb~3kb，質(zhì)粒本身是4kb。我一般酶切3~4h。或者體系不對(duì)？我是20μL加0.5μL的酶。 2014-05-13 16:48:57
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ruchang2013: 金幣+3, 謝謝，是不是酶切時(shí)間也過(guò)短��！我這次將質(zhì)粒重新酶切觀察到2條帶，一條在3kb~5kb,另一條帶在2kb~3kb，質(zhì)粒本身是4kb。我一般酶切3~4h。或者體系不對(duì)？我是20μL加0.5μL的酶。 2014-05-13 16:48:57
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引物與重組質(zhì)粒其他位置發(fā)生的非特異結(jié)合，有大條帶很正常~ 你的marker最大量程是5K而你的重組質(zhì)粒是7K？marker不太合適，換一個(gè)更大一些的吧。不過(guò)從圖上看連的不是你的基因，酶切偏小，PCR也沒(méi)有，重組失敗。~ |
2樓2014-05-12 15:13:20
luwei13566
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3樓2014-05-13 17:43:45
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4樓2014-05-13 19:52:51
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gyesang: 金幣+2, 鼓勵(lì)回帖交流經(jīng)驗(yàn)！ 2014-06-01 16:58:29
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| 我一般都是20ul加1ul酶 37度4個(gè)小時(shí)。 |
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ruchang20135樓2014-05-13 20:52:37
ruchang2013
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6樓2014-05-14 14:34:26
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7樓2014-05-14 14:35:27
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8樓2014-05-14 15:27:23
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