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用雙縮脲法測定水解液中多肽含量的相關(guān)問題
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| 我最近在做雙縮脲法測定水解液中多肽含量,我使用谷胱甘肽做標準曲線的,查閱相關(guān)文獻發(fā)現(xiàn)有些說在540nm處有最大吸收波長,有些是在310nm處有最大吸收波長。。。。。。我測的是320nm處有最大吸收波長,不知道對不對,還有在測水解液中多肽濃度時測出的結(jié)果遠遠多出樣品量,我測的方法如下:取5mL水解液(酶解液凍干后用5% TCA溶液配成4mg/ml),加入5 mL 10% TCA溶液,于漩禍混合儀上混合均勻,靜置20 min,然后在4000 r/min條件下離心5 min,然后取0.5 mL上清液,加入5% TCA溶液5.5 mL,再加入4 .0mL 雙縮脲試劑(樣液:雙縮脲試劑=3:2,V/V),于漩禍混合儀上混合均勻,在4000 r/min條件下離心5 min,取上清液于最大吸收波長下測定吸光度值,對照標準曲線,代入回歸方程,求得樣品溶液中多肽濃度C(mg/mL),進而求得樣品中多肽含量。紫外分光光度計上測出的上清液中多肽含量是1.161mg/ml,那么我這5ml水解中多肽含量就是(1.161*20)mg/ml,遠遠高于5ml水解液中樣品的濃度,整來整去還是不知道怎么回事,請各位老師同學幫我分析分析,萬分感謝 |

新蟲 (小有名氣)
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