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[求助]
用雙縮脲法測定水解液中多肽含量的相關問題
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| 我最近在做雙縮脲法測定水解液中多肽含量，我使用谷胱甘肽做標準曲線的，查閱相關文獻發(fā)現(xiàn)有些說在540nm處有最大吸收波長，有些是在310nm處有最大吸收波長。。。。。。我測的是320nm處有最大吸收波長，不知道對不對，還有在測水解液中多肽濃度時測出的結果遠遠多出樣品量，我測的方法如下：取5mL水解液(酶解液凍干后用5% TCA溶液配成4mg/ml)，加入5 mL 10% TCA溶液，于漩禍混合儀上混合均勻，靜置20 min，然后在4000 r/min條件下離心5 min，然后取0.5 mL上清液，加入5% TCA溶液5.5 mL，再加入4 .0mL 雙縮脲試劑（樣液：雙縮脲試劑=3:2，V/V），于漩禍混合儀上混合均勻，在4000 r/min條件下離心5 min，取上清液于最大吸收波長下測定吸光度值，對照標準曲線，代入回歸方程，求得樣品溶液中多肽濃度C（mg/mL），進而求得樣品中多肽含量。紫外分光光度計上測出的上清液中多肽含量是1.161mg/ml，那么我這5ml水解中多肽含量就是（1.161*20）mg/ml，遠遠高于5ml水解液中樣品的濃度，整來整去還是不知道怎么回事，請各位老師同學幫我分析分析，萬分感謝 |
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李招9377
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