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冷雁孤旅木蟲 (著名寫手)
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[求助]
關(guān)于半定量PCR的內(nèi)參調(diào)節(jié)問題 已有5人參與
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| 最近在做半定量PCR，確定了內(nèi)參基因的循環(huán)數(shù)，但是內(nèi)參基因額亮度一直不好調(diào)整，需要調(diào)整模板CDNA的濃度，但是工作量太大了，我想問一下有沒有哪位大俠知道如何快速調(diào)整CDNA的模板量，從而使得內(nèi)參基因在選定的擴(kuò)增循環(huán)數(shù)內(nèi)亮度相同呢？不勝感激。@西瓜@biostar2009 |
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冷雁孤旅
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9樓2014-05-19 11:46:28
gyesang
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2樓2014-05-18 18:09:41
wangpeng227
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1. 提取的RNA要測(cè)定濃度，然后稀釋到一致的濃度 2. 反轉(zhuǎn)錄用等量的RNA（之所以稀釋RNA，是為了在反轉(zhuǎn)錄時(shí)減小加樣誤差） 3. PCR時(shí)取等量的cDNA 要注意PCR儀的擴(kuò)增效率，如果PCR儀各孔之間的效率差很多的話，需要先校正PCR儀。 |
3樓2014-05-18 20:07:07
冷雁孤旅
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4樓2014-05-18 23:27:18
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