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lialee22木蟲(chóng) (著名寫(xiě)手)
黑鉆會(huì)員
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[求助]
雙酶切之后怎么知道切開(kāi)了呢？ 已有4人參與
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pET-28a(+)，酶切位點(diǎn)為 Nde I 和 Not I 。兩個(gè)位點(diǎn)之間只有70bp。 雙酶切之后我怎么知道切開(kāi)了呢？ 跑電泳的時(shí)候70bp早就跑出去了。 用單酶切做對(duì)照，也不行。 有什么辦法嗎？ |
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jonew
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4樓2014-05-22 21:27:11
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2樓2014-05-22 18:10:50
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3樓2014-05-22 18:13:07
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
lialee22(西門(mén)吹雪170代發(fā)): 金幣+2, 鼓勵(lì)回帖交流 2014-05-27 21:10:31
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lialee22(西門(mén)吹雪170代發(fā)): 金幣+2, 鼓勵(lì)回帖交流 2014-05-27 21:10:31
| 告訴你，雙酶切如果中間只有70bp那你就別想看到兩條帶，你雙酶切時(shí)間久點(diǎn)，跟原質(zhì)粒對(duì)照，只要兩個(gè)酶在通用buffer中活性很高的話(huà)，會(huì)切開(kāi)，你在連接片段，應(yīng)該會(huì)成功，如果切太大量的話(huà)，一是浪費(fèi)，二是也不一定可以看到小條帶。建議，雙酶切時(shí)間久點(diǎn)，在后面你構(gòu)建質(zhì)粒后還有測(cè)序保證呢。 |
5樓2014-05-23 13:08:38
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