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一路向前看鐵蟲 (初入文壇)
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[交流]
western blot出現(xiàn)多條帶是什么原因
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一抗是兔多抗，稀釋度1:800；二抗1:3000，上樣大約40ug，TBST洗膜3*10min，結(jié)果如圖出現(xiàn)明顯三條帶（大約110、100、85KD），另外還有些微弱的條帶，這個(gè)蛋白目前沒人做過，預(yù)測的分子量是63kd，實(shí)際分子量未見報(bào)道，請問這是什么原因造成的？是蛋白量太大？抗體濃度太高？應(yīng)該選用哪一條帶？求高手解答 ~ZDNZPNNBPX)O~X@NR}$1}C.jpg |
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 蛋白質(zhì)生物學(xué)實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn) |
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2樓2014-06-11 09:43:03
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3樓2014-06-11 09:45:39
Rubisco580
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7樓2014-06-14 11:30:09
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可能原因： 1.封閉不好。5%脫脂奶粉或者3%BSA或質(zhì)量不好，或者用量不足，或者時(shí)間不夠等。 2.一抗的濃度過大，引起抗體與非抗體的特異性識別的抗原也發(fā)生了一定程度上的相互作用，這時(shí)洗膜是洗不下去的。 3.抗體質(zhì)量不高。至少一抗應(yīng)該用單克隆抗體，其識別的抗原免疫簇位點(diǎn)不是唯一的。而一抗若為多克隆抗體，則是是一群抗體的組合，因?yàn)槎嗫寺】贵w的識別的抗原免疫簇位點(diǎn)不是唯一的，一抗可能與非目的抗原也會(huì)存在抗原識別。 |
8樓2014-07-07 23:29:02
yanjunyan
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9樓2014-08-23 10:27:50
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