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hero352

金蟲(chóng) (小有名氣)

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[求助] 引物設(shè)計(jì)保護(hù)堿基的選擇已有4人參與

上游保護(hù)堿基 GCTTGGAC CATATG nde1
下游保護(hù)堿基CGCG CTCGAG xho
最近一直做基因克隆，可是載體和目的片段一直連不上，大家?guī)臀铱纯词遣皇且镌O(shè)計(jì)時(shí)保護(hù)堿基選不的合適，是不是切不開(kāi)啊，酶切位點(diǎn)分別是NDE1和XHO1

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1樓 2014-06-11 21:44:52

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Neo2000

木蟲(chóng) (著名寫(xiě)手)

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【答案】應(yīng)助回帖

引用回帖:

5樓: Originally posted by hero352 at 2014-06-12 21:36:35
我是高保真酶PCR，不能直接連T載體，如果PCR產(chǎn)物加A的話，不知道效率高不高...

你這兩種選擇效率都不高

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7樓2014-06-12 22:03:49

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Neo2000

木蟲(chóng) (著名寫(xiě)手)

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【答案】應(yīng)助回帖

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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
gyesang: 金幣+2, 鼓勵(lì)交流！ 2014-06-11 23:36:39

你可以把片段連在t載體上，再切下來(lái)，不必加保護(hù)堿基

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2樓2014-06-11 22:17:42

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luwei13566

木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)

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【答案】應(yīng)助回帖

★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
gyesang: 金幣+2, 我們一般是3個(gè)，沒(méi)發(fā)現(xiàn)有太大的什么問(wèn)題 2014-06-11 23:38:30

XhoI加3個(gè)保護(hù)堿基切20h效率約為75%，我一般都是加6個(gè)保護(hù)堿基。而且XhoI4個(gè)位點(diǎn)的連接效率低于其他位點(diǎn)，一般都是要長(zhǎng)時(shí)間連接的。

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3樓2014-06-11 22:59:36

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匿名

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4樓2014-06-12 09:55:25

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